トリパノソーマ表面蛋白質に対するラクダ科動物単一鎖抗体作製と構造機能解析への応用

骆驼科锥虫表面蛋白单链抗体的制备及其在结构功能分析中的应用

• 批准号: 07F07183
• 负责人: 杉本 千尋
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07183/
• 关键词: トリパノソーマ; 単一鎖抗体; 抗体ライブラリー; 表面糖たんぱく質; 感染症診断

ラクダ、ラマなどラクダ科動物はH鎖一本から成る単一鎖抗体を作り出すことが知られており、この単一鎖抗体のコンパクトな抗原結合部位の構造と高度の熱安定性(100℃の加熱にも安定)という性質を利用して、特に通常の哺乳動物・鳥類抗体が認識し得ない構造に対する抗体が得られる可能性が高い。本計画では、哺乳動物に病原性を有するトリパノソーマの表面たんぱく質に対する単一鎖抗体を作製し、それを利用して蛋白質の構造、機能解析を行うとともに、このような抗体の診断、治療への利用の可能性を模索する。Trypanosoma evansiで免疫したラマ末梢血リンパ球から作製したファージライブラリをT.brucei血流型と昆虫型(プロサイクリック型)の2種類の抗原をコートしたプレート上でパンニングを実施し、抗原と結合するファージを選択的に濃縮し、最終的に抗原と特異的に反応するファージクローンを得た。得られたファージ抗体の反応特異性を酵素抗体法で検討した結果、2種類の抗原と交差反応する抗体であることが判明した。さらに、挿入された一本鎖抗体の遺伝子解析をした結果、抗体定常部分を含む可変部位の配列が確認でき、アライメントの結果では5群に分けられた。次いで、同じファージライブラリーについて、T.evansi抗原を用いて同様のスクリーニングを行い、反応性を有するクローンを得て、抗体遺伝子解析を実施した。上記の様にトリパノソーマを群特異的に検出できる一本鎖抗体を得たことは、人あるいは家畜のトリパノソーマ感染症の診断、治療法開上、貴重な試薬として利用できる。特に、熱に対する安定性を活用し熱帯地方でも長期保存可能な診断試薬として利用できる可能性がある。さらに一本鎖抗体のコンパクトな構造的特性を活かした抗原解析にも利用できる。

The structure of antigen-binding site of antigen-binding antibody is highly thermally stable (stable under heating at 100℃), and the properties of antigen-binding antibody are highly likely to be used in mammals and birds. This project aims to explore the possibility of making and utilizing anti-mammalian antibodies against mammalian pathogens, protein structure and function analysis, as well as diagnostic and therapeutic uses of anti-mammalian antibodies. Trypanosoma evansi has two types of antigens: T.brucei bloodstream type and insect type, which are immune to the virus, T.brucei bloodstream type and insect type. The results of the enzyme antibody method were as follows: In addition, the results of the analysis of the antibody fragments of this antibody, the identification of the antibody constant part, the allocation of variable parts, and the results of the analysis of the antibody fragments of this antibody are analyzed in five groups. In addition, the use of T.evansi antigen in the analysis of antibody fragments was carried out. The above mentioned diagnosis and treatment of infectious diseases in livestock and poultry are important for the detection and utilization of a specific antibody. The stability of the heat exchanger and the possibility of long-term storage are discussed. In addition, the characteristics of the Koninkotna structure of a basic antibody can be utilized for antigen analysis.