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MAPKKKのインタラクトームによるストレス受容・認識の分子機構の網羅的解明

利用MAPKKK相互作用组全面阐明应激接收和识别的分子机制

基本信息

批准号：
15659014
负责人：
一條秀憲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659014/
关键词：
MAPキナーゼキナーゼストレスインタラクトーム

项目摘要

本研究計画は、環境ストレス応答の分子メカニズムの解明を目指し、まずその足掛かりのために、MAPKKKの網羅的なインタラクトーム解析(生体分子間相互作用の組織的解析)を行うものである。本年度は昨年度に引き続き効率的Two-hybridスクリーニング法の開発を行った。我々がこれまでASK1研究で用いてきた酵母Two-hybridシステムを基本として、さらに、使用する酵母種や基本手法などの条件について検討を重ね、より迅速でかつ正確な改良型酵母Two-hybridシステムの構築を行った。その結果、接合を利用したクローンテック社の酵母Two-hybridシステムを改良することにより、様々なキナーゼをベイトとするスクリーニングを同一のプレイライブラリーから同程度のバックグラウンドでスクリーニングすることが可能となった。そこで実際に機能未知の新規MAPキナーゼキナーゼキナーゼASK3の生理機能解明を目的として、腎臓のcDNAライブラリーを用いた酵母Two-hybrid screeningによってASK3結合分子の同定を試み、両者の関係からその生理的役割について検討した。その結果、ASK3結合蛋白質としてWNK4を同定し、ASK3との共発現によりWNK4がリン酸化されること、高浸透圧刺激によりASK3が不活性化され、それに伴いWNK4が脱リン酸化されることを明らかにした。

This research project aims to clarify the molecular structure of environmental factors, and analyze the molecular structure of MAPKKK network (analysis of the interaction between living molecules). This year, the development of the Two-hybrid technology was launched in the first half of 2015. In our ASK1 study, we used the yeast Two-hybrid system as a basic tool to quickly construct the correct yeast Two-hybrid system. The results of the joint use of the Two-hybrid system can be improved by using the same two-hybrid system. The new regulation of ASK3 with unknown function in practice is aimed at clarifying the physiological function of ASK3, and the cDNA of kidney is used in yeast Two-hybrid screening. The new regulation of ASK3 binding molecule is aimed at clarifying the physiological function of ASK3. ASK3 binding protein is not activated, ASK3 binding protein is inactivated, ASK3 binding protein is inactivated.