DNA複製因子の機能解析からウイルス増殖制御機構解明へ向けて

从DNA复制因子的功能分析到病毒生长控制机制的阐明

• 批准号: 15659109
• 负责人: 吉田 健一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Meiji University (2004)The University of Tokyo (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659109/
• 关键词: Geminin; DNA複製因子; EBV; 細胞周期; DNA複製; 相同組み換え; 癌; MCM7

1.ヒト染色体複製開始におけるDNA複製因子の解析ヒト大腸がん細胞株HCT116において、Gemininのエクソン2(APC/Cによる細胞周期依存的なタンパク分解に関与するDestruction boxを含む)を相同組み換えによりノックアウトした。この細胞を用いたアッセイから、細胞周期非依存的なGemininタンパクの存在が、MCMヘリケース遺伝子群のオリジンへの結合を阻害し、細胞周期G1期からS期への進行を阻害した。さらに、細胞内においてp53の活性化を認めた。これらはDNA複製因子であるCdt1の強制発現により緩和された。DNA複製因子であるGeminin、Cdt1、MCM10およびTopBP1の発現制御を解析した。結果、転写因子E2Fによる活性化とpRbによる不活性化を認めた。これらプロモーター活性および内在性の発現は、培養細胞において血清飢餓によるGO期停止で減弱し、その後、血清添加により細胞周期がG1期からS期へ進行するのに同調して増強した。2.EBVおよびHPVゲノム複製制御上述したGemininエクソン2のノックアウト細胞において、エプスタイン・バーウイルス(EBV)の自律複製配列(OripおよびEBNA1)を有するプラスミドのコロニー形成能は低下した。低下したコロニー形成能は、Cdt1の強制発現により復活した。以上より、EBVの細胞内複製をGeminin/Cdt1が制御する事実を解明した。ヒトパピローマウイルス(HPV)のE7タンパクの過剰発現がGemininおよびCdt1のプロモーター活性を約2倍に増強すると判明した。一方、HPVのE6タンパクによる活性増強は認められなかった。以上より、HPV感染により細胞内で発現したE7タンパクがpRBと結合することで、E2Fの機能が亢進しDNA複製因子の発現を増強させると推察される。

1. Analysis of DNA replication factors at the start of chromosome replication in human colon cell line HCT116. The same components of DNA replication in human colon cell line HCT116 were analyzed by Geminin and S2 (APC/C). The cell cycle is not dependent on the existence of Geminin, the combination of MCM and its subunits, and the progress of G1 and S phases of the cell cycle. The activation of p53 in cells is recognized. The DNA replication factor was found to be responsible for the stress response of Cdt1. DNA replication factors such as Geminin, Cdt1, MCM10 and TopBP1 are analyzed. The results showed that the activation and inactivation of E2F were significantly different. The activity and intrinsic development of these cells decreased during serum starvation and increased during serum addition and during cell cycle progression from G1 to S. 2. EBV and HPV must replicate to control the above-mentioned Geminin 2 cells. The self-replicating alignment (Orip and EBNA1) of EBV has reduced the ability of DNA formation. Low temperature, low temperature, low The above-mentioned problems in the regulation of EBV intracellular replication by Geminin/cdt1 have been clarified. It was found that the activity of Geminin and Cdt1 increased by about 2 times due to the occurrence of HPV E7 protein. One party, HPV E6, increased activity, and increased resistance. These results suggest that HPV infection may cause intracellular expression of E7, pRB binding, and increased expression of DNA replication factors due to E2F hyperfunction.

项目成果

Peptide binding to Geminin and inhibitory for DNA replication.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.03.035
• 发表时间: 2004-04
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kenichi Yoshida;I. Inoue

Regulation of Geminin and Cdtl expression by E2F transcription factors.

E2F 转录因子对 Geminin 和 Cdtl 表达的调节。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Oncogene 23
• 作者: Kenichi Yoshida et al.;Kenichi Yoshida et al.;Kenichi Yoshida et al.
• 通讯作者: Kenichi Yoshida et al.

The destruction box of human Geminin is critical for proliferation and tumor growth in human colon cancer cells

• DOI: 10.1038/sj.onc.1206987
• 发表时间: 2004-01
• 期刊: Oncogene
• 影响因子: 8
• 作者: Kenichi Yoshida;N. Oyaizu;Anindya Dutta;I. Inoue

Expression of MCM10 and TopBP1 is regulated by cell proliferation and UV irradiation via the E2F transcription factor

• DOI: 10.1038/sj.onc.1207829
• 发表时间: 2004-08-19
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Yoshida, K;Inoue, I
• 通讯作者: Inoue, I

Yoshida, K., Inoue, I.: "Conditional expression of MCM7 increases tumor growth without altering DNA replication activity"FEBS Letters. 553. 213-217 (2003)

Yoshida, K., Inoue, I.：“MCM7 的条件表达可增加肿瘤生长而不改变 DNA 复制活性”FEBS Letters。