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成人骨髄幹細胞の可塑性を利用した先天性疾患に対する胎児細胞療法の基礎的検討

利用成体骨髓干细胞的可塑性进行胎儿细胞治疗先天性疾病的基础研究

基本信息

批准号：
15659253
负责人：
辻浩一郎
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659253/
关键词：
先天性疾患胎仔細胞療法骨髄細胞幹細胞可塑性造血発生

项目摘要

先天性疾患に対する胎仔細胞療法の基盤技術開発を目的として、マウス胎仔の心腔内への細胞注射法について検討した。今回の検討では、胎生10日のマウス胎仔の心腔内へは、比較的容易にAc-LDL-DiIを注射することが可能であった。そこで試みに、本法を用いてマウス胎仔AGM領域における造血発生について解析した。胎生10日のマウス胎仔の心腔内にAc-LDL-DiIを注射した後、ドナー胎仔を全胚培養法を用いて12時間培養した。そうした培養マウス胎仔では、背側大動脈や臍帯動脈にhematopoietic clusterが認められ、末梢血中の一部にはDiI+細胞が存在した。これらのDiI+細胞の15%がc-Kit、34.2%がCD31、28.1%がCD34、7.7%がSca-1を発現していた。FACSで分離されたDiI+/c-Kit+細胞は、未分化な芽球細胞とマクロファージから構成され、コロニー培養では混合コロニーを含む種々のコロニーが形成された。また、これらのDiI+/c-Kit+細胞には、新生児マウスの造血再構築能を有する細胞が含まれていた。さらに、3,000-4,000個の末梢血DiI+細胞を胎生10.5日のマウス胎仔の心腔内に注射した後、全胚培養法で4時間培養すると、DiI+細胞は胎仔肝に特異的にcolonizeした。以上の結果より、胎生10-10.5日のマウス胎仔のAGM領域で発生する造血の少なくとも一部は内皮由来であり、内皮細胞由来の細胞は胎仔肝にcolonizeし得ることが明かとなり、心腔内注射法はマウス胎仔への細胞移植法として有用であった。本法を用いることにより、先天性疾患に対する胎仔細胞療法のためのマウスモデルの構築が可能となった。

The development of fetal cell therapy for congenital disorders is aimed at detecting fetal intracardiac cell injection. This time around, it is easier to inject Ac-LDL-DiI into the heart cavity of the fetus on the 10th day of birth. This method is used to analyze fetal AGM in the field of hematopoietic development. After injection of Ac-LDL-DiI into the heart cavity of the fetus at 10 days of birth, the fetus was cultured for 12 days by whole embryo culture method. In the fetal culture, haematopoietic clusters in the dorsal and umbilical arteries were identified, and a portion of the peripheral blood was found to contain DI + cells. 15% of DiI+ cells were c-Kit, 34.2% CD31, 28.1% CD34, and 7.7% Sca-1. FACS isolation of DiI+/c-Kit+ cells, undifferentiated germ cells, mixed germ cells, and mixed germ cells DiI+/c-Kit+ cells contain cells capable of hematopoietic reconstruction. 3,000-4,000 DiI+ cells from peripheral blood were colonized 10.5 days after fetal intracardiac injection and 4 days after whole embryo culture. The above results show that the fetal AGM field is developed from 10 to 10.5 days after birth, and the endothelial cells are derived from the fetal liver. This method can be applied to fetal cell therapy for congenital disorders.