マウス胎仔移植法を用いた成体骨髄細胞の多分化能の解析

小鼠胎儿移植法分析成体骨髓细胞的多能性

• 批准号: 15039211
• 负责人: 辻 浩一郎
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15039211/
• 关键词: マウス胎仔移植法; 心腔内注射; 造血発生; AGM領域; 胎仔肝; 内皮細胞

マウス胎仔移植法を用いた成体骨髄細胞の多分化能の解析のための基盤技術開発を目的として、マウス胎仔の心腔内への細胞注射法について検討した。胎生10日のマウス胎仔の心腔内へは、比較的容易にAc-LDL-DiIを注射することが可能であった。そこで試みに、本法を用いてマウス胎仔AGM領域における造血発生について解析した。胎生10日のマウス胎仔の心腔内にAc-LDL-DiIを注射した後、ドナー胎仔を全胚培養法を用いて12時間培養した。そうした培養マウス胎仔では、背側大動脈や臍帯動脈にhematopoietic clusterが認められ、末梢血中の一部にはDiI+細胞が存在した。これらのDil+細胞の15%がc-Kit、34.2%がCD31、28.1%がCD34、7.7%がSca-1を発現していた。FACSで分離されたDiI+/c-Kit+細胞は、未分化な芽球細胞とマクロファージから構成され、コロニー培養では混合コロニーを含む種々のコロニーが形成された。また、これらのDiI+/c-Kit+細胞には、新生児マウスの造血再構築能を有する細胞が含まれていた。さらに、3,000-4,000個の末梢血DiI+細胞を胎生10.5日のマウス胎仔の心腔内に注射した後、全胚培養法で4時間培養すると、DiI+細胞は胎仔肝に特異的にcolonizeした。組織学的観察では、DiI+細胞はextra-sinusoidal regionに存在した。以上の結果より、胎生10-10.5日のマウス胎仔のAGM領域で発生する造血の少なくとも一部は内皮由来であり、内皮細胞由来の細胞は胎仔肝にcolonizeし得ることが明かとなり、心腔内注射法はマウス胎仔への細胞移植法として有用であった。本法を用いることにより、マウス胎仔移植法による成体マウス骨髄細胞の多分化能の解析が可能となったと考えられた。

マ ウ ス tire seed grafting を with い た の more adult bone marrow cells can differentiate の parsing の た め の plate technology open 発 を purpose と し て, マ ウ ス tire tsai の heart cavity へ の cell injections に つ い て beg し 検 た. On the 10th day of gestation, <s:1> ウス ウス the へ in the fetal cavity is relatively easy to にAc-LDL-DiIを injection する とが とが とが may であった. そ こ で try み に, this law を い て マ ウ ス tire tsai AGM field に お け る hematopoietic 発 raw に つ い て parsing し た. Viviparous 10 の マ ウ ス tire tsai の heart cavity に Ac - LDL - DiI を し injection, after た ド ナ ー tire tsai を を whole embryo culture method with い て 12 time cultivating し た. そ う し た cultivate マ ウ ス tire tsai で は, dorsal artery や umbilical 帯 artery に hematopoietic cluster が recognize め ら れ, peripheral blood の a に は DiI + cells exist が し た. こ れ ら の Dil + cells の が c - Kit, 15% and 34.2% が 28.1% が CD31, CD34, 7.7% が Sca - 1 を 発 now し て い た. Both FACS で separation さ れ た DiI Kit + + / c - cell は, undifferentiated な gemmule cells と マ ク ロ フ ァ ー ジ か ら constitute さ れ, コ ロ ニ ー cultivate で は mixed コ ロ ニ ー を む 々 species. の コ ロ ニ ー が form さ れ た. ま た, こ れ ら の DiI Kit + + / c - cell に は, where new マ ウ ス の hematopoiesis to construct can have す を が る cells contain ま れ て い た. さ ら に, 3000-4000 the DiI + の peripheral blood cells を viviparous 10.5 day の マ ウ ス tire tsai の heart cavity injection に し た after, the whole embryo cultivation method 4 time で す る と, DiI + cells は tire seed liver に specific に colonize し た. Histological 観 examination で で and に of DiI+ cells に extra-sinusoidal region た present. の above results よ り 10-10.5 days, viviparous の マ ウ ス tire tsai の AGM field で 発 raw す る hematopoietic の less な く と も a は endothelial origin で あ り, endothelial cell origin の は tire seed liver に colonize し have る こ と が Ming か と な り, heart cavity injection は マ ウ ス tire tsai へ の cell transplants と し て useful で あ っ た. This law を with い る こ と に よ り, マ ウ ス tire seed grafting に よ る adult マ ウ ス の bone marrow cells can differentiate の more resolution が may と な っ た と exam え ら れ た.

项目成果

辻浩一郎: "血液細胞アトラス"(印刷中).

辻晃一郎：《血细胞图谱》（正在出版）。

Nosaka T, Morita S, Kitamura H, Nakajima H, Shibata F, Kataoka Y, Morikawa Y, Kawashima T, Ito T, Ebihara Y, Senba E, Tsuji K, Makishita F, Yoshida N, Kitamura T: "Mammalian twisted gastrulation is essential for skeleto-lymphogenesis."Mol Cell Biol. 23. 2

Nosaka T、Morita S、Kitamura H、Nakajima H、Shibata F、Kataoka Y、Morikawa Y、Kawashima T、Ito T、Ebihara Y、Senba E、Tsuji K、Makishita F、Yoshida N、Kitamura T：“哺乳动物扭曲原肠胚形成是

Ebihara Y, Manabe A, Tanaka R, Yoshimatsu T, Ishikawa K, Iseki T, Hayakawa J, Maeda M, Asano S, Tsuji K: "Successful treatment of natural killler (NK) cell leukemia following along standing chronic active Epstein-Barr virus (CAEBV) infection with allogene

Ebihara Y、Manabe A、Tanaka R、Yoshimatsu T、Ishikawa K、Iseki T、Hayakawa J、Maeda M、Asano S、Tsuji K：“成功治疗慢性活动性 Epstein-Barr 病毒后的自然杀伤 (NK) 细胞白血病

辻浩一郎: "造血幹細胞並びにサイトカインの基礎と応用"(印刷中).

Koichiro Tsuji：“造血干细胞和细胞因子的基础和应用”（出版中）。

Sugiyama D, Ogawa M, Hirose I, Jaffredo T, Arai K, Tsuji K: "Erythropoiesis from acetyl LDL-incorpolating endothelial cells into circulation at pre-liver stage."Blood. 101. 4733-4738 (2003)

Sugiyama D、Okawa M、Hirose I、Jaffredo T、Arai K、Tsuji K：“乙酰 LDL 掺入内皮细胞在肝前阶段进入循环的红细胞生成。”血液。