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チャネル病としての緑内障への分子生物学的アプローチ

青光眼作为通道疾病的分子生物学方法

基本信息

批准号：
15659407
负责人：
高井章
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.本研究では、房水流出路として重要な働きをする毛様体平滑筋の張力維持に必要なCa^<2+>イオン流入経路として機能するイオンチャネルをコードしていると考えられているtransient receptor potenrial canonical(trpc) geneの異常が緑内障の発症に関与する可能性につき検討した。これまで動物における緑内障は、ぶどう膜炎などによる続発性のものがイヌやウマで数例報告されているに過ぎない。今回、実験動物のtrpc遺伝子を変化させることにより緑内障の実験モデル作成するために役立つと思われる、下記のようなデータを得た。2.ヒトおよびマウスについて現在までに報告されている7種の哺乳類型trpc遺伝子の既知配列をもとにいろいろなプライマペアを合成、RT-PCRによりウシおよびヒト毛様体筋において発現しているtrp遺伝子を定量的に検索し、trpc1,3,4および6に対応するmRNAの存在を確認した。3.上記trpcの大半について全cDNA配列を決定するとともに、蛍光抗体染色法により、これらによりコードされる蛋白質が、毛様体筋細胞膜に発現していることを確認した。。4.得られたcDNAを発現ベクトルに組み込んだものを単独、またはM_3型ムスカリン受容体遺伝子と同時に、培養細胞の細胞内に導入、発現してくるチャネルの性質を電気生理学的に検討する段階に漕着けた。現在、trpc遺伝子のpore-forming regionに相当する部分を改変し、培養細胞に発現させ、チャネル活性への影響を調べる実験を進めている。5.今後、これまでに得られたデータに基づき、各種trpc遺伝子をノックアウトしたマウスを作成を試みる計画である。そのような実験動物から採取した組織を用い、収縮実験や、パッチクランプ法を用いた電気生理学的実験を行うことにより緑内障の発生メカニズムを分子レベルで検討することを目指す。

1. In this study, the importance of the outlet of aqueous fluid and the maintenance of tension of the smooth muscles of the hairy body are necessary. Ca^<2+> Transient Abnormalities in the receptor potenrial canonical (trpc) gene are related to the risk of developing green cataract and the possibility of developing it.これまでanimal におけるgreen cataract は、ぶどうinflammatory などによる続Report on several cases of the disease. This time, 実験animalのtrpc缝子を変化させることによりGreen Cataractの実験モデル成するために佫立つと思われる、下记のようなデータを得た. 2. ヒトおよびマウスについてNow までにreports 7 types of breastfeeding tr PC 缝子のknown combination of をもとにいろいろなプライマペアを synthesis, RT-PCRによりウシおよびヒト毛様体 strength において発appear しているtrp伝子をquantitativeにCheck the existence of trpc1,3,4 and trpc1,3,4 and confirm the existence of mRNA. 3. Determination of the complete cDNA alignment of most of the above-mentioned trpc, and the use of light antibody staining methodり, これらによりコードされるprotein が, hair 様body muscle cell membrane に発appears していることをconfirmation した. . 4. Obtained the られたcDNAを発成ベクトルに集团み込んだものを単多, またはM_3 type ムスカリンReceiver body remains 伝子とAt the same time, the cultured cells are introduced into the cells and the properties and physiology of the electrophysiology are revealed step by step. Now, the pore-forming region of the trpc remains is relatively unchanged, and the cultured cells are now active, and the activity of the cultured cells is affected. 5. From now on, all kinds of trpc The remaining をノックアウトしたマウスを is made and the trial みる plan is made.そのような実験animal からtake したorganism を Use い, shrink 実験や, パッチクランプ法をいた电気生The principles of Neo-Confucianism are as follows: