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チャネル病としての緑内障への分子生物学的研究法導入

青光眼作为通道性疾病的分子生物学研究方法介绍

基本信息

批准号：
13877287
负责人：
高井章
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.従来、緑内障の原因遺伝子としては、trabecular meshwork glucocorticoid response(TIGR)gene等の変異が知られているのみである。本研究では、房水流出路として重要な働きをする毛様体平滑筋の張力維持に必要なCa^<2+>イオン流入経路として機能するイオンチャネルを発現すると考えられているtransient receptor potenrial(trp)geneの異常が緑内障の発症に関与する可能性につき検討した。これまで動物における緑内障は、ぶどう膜炎などによる続発性のものがイヌやウマで数例報告されているに過ぎない。今回、実験動物のtrp遺伝子を変化させることにより緑内障の実験モデル作成するために役立つと思われる、下記のようなデータを得た。2.ヒトおよびマウスについて現在までに報告されている7種の哺乳類型trp遺伝子の既知配列をもとにいろいろなプライマペアを合成、RT-PCRによりウシおよびヒト毛様体筋において発現しているtrp遺伝子を定量的に検索した。3.PCR産物の塩基配列を決定、さらに、その大半について全cDNA配列を決定した。4.得られたcDNAを発現ベクトルに組み込んだものを単独、またはM_3型ムスカリン受容体遺伝子と同時に、培養細胞の細胞内に導入、発現してくるチャネルの性質を電気生理学的に検討する段階に漕着けた。現在、trp遺伝子のpore-forming regionに相当する部分を改変し、培養細胞に発現させ、チャネル活性への影響を調べる実験を進めている。5.今後、これまでに得られたデータに基づき、各種trp遺伝子をノックアウトしたマウスを作成を試みる計画である。そのような実験動物から採取した組織を用い、収縮実験や、パッチクランプ法を用いた電気生理学的実験を行うことにより緑内障の発生メカニズムを分子レベルで検討することを目指す。

1. The cause of cataract, cataract, cataract. This study examines the importance of aqueous humor outflow pathways for maintaining the tension of smooth muscle cells in the hair and examines the possibility of abnormal transient receptor potential (trp)gene abnormalities associated with cataract development. A few cases of cataract in animals were reported. Now, the animal's trp gene has been transformed into a cataract, and the cataract has been created. 2. The present report describes the sequence of known trp genes of 7 mammalian types, the synthesis, RT-PCR, and quantitative detection of trp genes. 3. The nucleotide alignment of PCR products is determined, and most of them are determined by the complete cDNA alignment. 4. The expression of cDNA was detected in the isolated and M_3-type receptor gene, and the intracellular introduction, expression, and properties of the receptor gene in cultured cells were studied at the electrophysiological level. Now, some of the changes in the pore-forming region of trp genes, the development of cultured cells, and the regulation of cell activity are progressing. 5. In the future, we will try to make plans for the future. In animals, the development of cataracts is a matter of molecular investigation, and the development of cataracts is a matter of molecular investigation.