口腔粘膜疾患の新たな発症機序「T細胞マイクロキメリズム」の検討

口腔粘膜疾病新致病机制“T细胞微嵌合”研究

基本信息

批准号：
15659482
负责人：
中村誠司
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

シェーグレン症候群(SS)と口腔扁平苔癬(OLP)はともに未だに原因不明の難治性疾患であるが、SSとOLPに極めて類似した病態が同種骨髄移植後の移植片対宿主病(GVHD)にみられることが判ってきた。一方、妊娠中に母体に移行した胎児のT細胞が出産後も長期にわたり母体内に存続するマイクロキメリズムという状態が起こり得ることも明らかになった。こT細胞のマイクロキメリズムは、子供に母親由来のT細胞が生着しても起こり、さらには輸血後にも生じると考えられ、いずれにしても宿主においてGVHDを引き起こす可能性がある。これらの知見に加え、SSもOLPも女性に好発し、出産後の発症が多く、C型肝炎ウイルス感染との関連が報告されていることなどを併せて考えたところ、T細胞マイクロキメリズムによってGVHDに類似した両疾患の発症が惹起されるという仮説の着想に至った。本研究の目的は、SSとOLPの病変局所に浸潤するT細胞を分子生物学的に解析し、宿主由来ではないT細胞の存在を見い出し、T細胞マイクロキメリズムによってGVHDに類似した両疾患の発症が惹起されるという仮説を証明することにある。今年度までに得られた研究実績は以下のとおりである。1.nested PCR法によるマイクロキメリズムの検出男児出産歴のある42例のSS患者と27例のOLP患者の末梢血単核球および病変局所の生検組織を用い、抽出したDNAからnested polymerase chain reaction (PCR)法によりY染色体に特異的な塩基配列部分を増幅し、PCR産物をサザンブロット解析することによりY染色体を検出した。39例のSS患者と25例のOLP患者における検討では、末梢血では全例で検出できなかったが、SSでは12例(28.6%)、OLPでは6例(22.2%)で検出できた。2.FISH法による宿主由来ではない細胞の分布解析前述の研究でY染色体が検出できた患者については、生検組織の凍結切片を作製し、Y染色体に特異的なプローブを用いたfluorescence in situ hybridization (FISH)法によりY染色体陽性細胞の頻度や病変内分布を検索した。PCR法によりY染色体が検出された2例のSS患者および6例のOLP患者での解析では、1000分の1程度の頻度でY染色体陽性細胞が検出された。今年度はさらに、FISH法と免疫染色法の二重染色によりY染色体陽性細胞がT細胞であることを証明することができた。

Sjogren综合征（SS）和口服地衣披体（OLP）都是未知原因的难治性疾病，但已经发现，在同种异性骨髓移植后，在移植物抗宿主病（GVHD）中与SS和OLP非常相似。另一方面，还揭示了可能发生微chimerism的状态，即在妊娠期间转移给母亲的胎儿T细胞在出生后很长一段时间内持续存在。人们认为这种T细胞的微chimerist被认为是当孩子植入母体T细胞时，即使在输血后也会发生，并且在任何情况下都可能导致宿主中的GVHD。除了这些发现外，我们还考虑了以下事实：SS和OLP在女性中都是常见的，并且频繁出生后的症状发作，并且已经报道了与丙型肝炎病毒感染的相关性，并且T细胞微神经症会导致两种疾病的假说与GVHD类似。这项研究的目的是分子生物学分析T细胞在SS和OLP中浸润病变，找到未宿主衍生的T细胞的存在，并证明T细胞微神经症可能导致两种疾病的发作。到今年获得的研究结果如下：1。使用外周血单核细胞和42例患者的局部病变和27名具有男性出生史的OLP患者对微神经的检测，Y染色体的局部病变，通过对嵌套的聚合物链反应进行分析（PCR）对DNA进行扩增（PCR），并检测到Y染色体的y染色体（PCR），并通过嵌套的DNA进行分析（PCR反应）。染色体。在一项针对39名SS患者和25名OLP患者的研究中，在所有病例中均未在外周血中检测到，但在SS中有12例（28.6％），OLP中有6例（22.2％）。 2。在先前的研究中可以检测到Y染色体的患者，对未从宿主得出的细胞分布分析，制备了活检组织的冷冻切片，并使用对Y Y型杂交（FISH）方法使用Y Chromosome的探针进行荧光（FISH）方法来搜索Y染色体阳性细胞的频率和Y染色体阳性细胞分布。在对两名SS患者和6例OLP患者的分析中，通过PCR检测到Y染色体，Y染色体阳性细胞的分析约为1000次。今年，我们能够进一步证明Y染色体阳性细胞是T细胞，通过使用鱼类方法和免疫染色方法进行双重染色。