再発性アフター性口内炎の発症分子機構の解明

阐明复发性后遗症性口腔炎的分子机制

基本信息

批准号：
12877328
负责人：
中村誠司
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

再発性アフター性口内炎は口腔粘膜疾患の中では最も頻度が高いものであるが、その発症原因は現在のところ全く不明である。従来の研究結果から、細菌と口腔粘膜との熱ショック蛋白の交叉反応性(一般にmolecular mimicryと呼ばれている)により自己免疫疾患に類似した反応が惹起されるという仮説を立て、それを証明するために以下の研究を行った。1)病変局所のTCR遺伝子のクローナリティーの解析検索材料として末梢血単核球および病変局所の生検組織を用い、抽出したRNAよりcDNAを作製し、PCR法によりTCR遺伝子のVDJC領域DNAを増幅した。PCR産物をサザンブロット解析することにより、末梢血単核球と病変局所との間でTCR Vα鎖およびVβ鎖の各ファミリーの発現量を比較したところ、病変局所では比較的限定されたVβ遺伝子ファミリーの発現がみられた。また、病変局所にはいくつかのクロノタイプの集積がみられた。2)レンサ球菌や結核菌の熱ショック蛋白由来の抗原ペプチドに反応するT細胞の解析末梢血単核球や病変局所から分離した単核球を、レンサ球菌や結核菌の熱ショック蛋白由来の抗原ペプチドと共に培養したところ、多くの症例で高い増殖活性がみられた。現在、増殖するT細胞を、上述の1)と同様の手技で解析したところ、病変局所で優位なTCR遺伝子を発現するT細胞がこのin vitroの系でも誘導できることが示された。以上の研究により、レンサ球菌や結核菌の熱ショック蛋白に反応するT細胞が再発性アフター性口内炎の発症に関与していることが強く示唆されたが、今後はそのTCR遺伝子の解析を行う必要がある。さらに、これらの抗原ペプチドが口腔粘膜上皮のどのタンパクと相同性があるのか、また、そのタンパクの発現にはどのような刺激が必要なのかを検討する必要があろう。

复发性骨后炎是最常见的口腔粘膜疾病，但目前发病的原因是完全未知的。基于先前的研究结果，我们假设细菌与口服粘膜之间热休克蛋白的交叉反应性（通常称为分子模仿）会导致类似于自身免疫性疾病的反应，并证明这一点，进行了以下研究。 1）分析TCR基因在局部病变处的克隆性用作搜索材料，以搜索局部病变的外周血单核细胞和活检组织，从提取的RNA中制备cDNA，并通过PCR扩增TCR基因的VDJC区域DNA。通过对PCR产物的Southern印迹分析，比较了外周血单核细胞和病变位置之间TCRVα和Vβ链家族的表达水平，并且在病变位置观察到Vβ基因家族的表达相对有限。此外，在病变部位观察到了几种表型积累。 2）分析T细胞对源自链球菌和结核分枝杆菌热休克蛋白的抗原肽的响应。当从外周血单核细胞中分离出的单核细胞和病变层与源自链球菌和结核分枝杆菌热休克蛋白的抗原肽一起培养时，许多病例显示出较高的增殖活性。当前，使用与上面1）中的1）技术分析了增殖的T细胞，并且表明表达TCR基因的T细胞在病变局域区域占主导地位，也可以在该体外系统中诱导。上述研究强烈表明，对链球菌和结核分枝杆菌的热休克蛋白有反应的T细胞参与了气孔炎后复发的发展，但将来有必要分析TCR基因。此外，有必要研究这些抗原肽在口服粘膜上皮中是同源的蛋白质，以及该蛋白质表达需要哪种刺激。