膜蛋白質の核輸送を規定する因子の同定

膜蛋白核转运调节因子的鉴定

基本信息

  • 批准号:
    16659073
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.05万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 2005
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

膜型増殖因子EGFファミリーメンバーは細胞膜表面でsheddingを受け、カルボキシ末端断片(C-terminal fragment ; CTF)を産生する。EGFファミリーメンバーのHB-EGFとamphiregulinのCTFについて解析をした結果、HB-EGF-CTF, amphiregulin-CTFともにER/核膜に移行し、集積した。本研究ではShedding後に細胞膜に残る膜ペプチドCTFがいかにしてER/核膜に移行するのか、またそれを規定する因子は何かを解析した。HB-EGF-CTF核移行の分子機構解析 sheddingによって初めて露出するHB-EGF-CTFアミノ末端を特異的に認識する抗体(抗HB-EGF-CTF-N抗体)を開発した。Western blot解析からこの抗HB-EGF-CTF-N抗体は、HB-EGF全長は認識せず、sheddingによって産生されるHB-EGF-CTFを特異的に認識することを確認した。次に抗HB-EGF-CTF-N抗体を用いてHB-EGF発現HT1080細胞を免疫染色した。Shedding誘導剤非存在化では抗HB-EGF-CTF-N抗体陽性は認められなかったが、Shedding誘導剤であるTPAで処理1時間後の免疫染色で、ER/核膜の染色陽性像を得た。更にTPAで処理時間を短縮し、同様に染色を行い細胞内局在を解析したところ、recycling eondosomeと思われる領域を染色した。そこでrecycling eondosomeのマーカーとなるトランスフェリン受容体を標識トランスフェリンで細胞内に取り込ませ、recycling eondosomeに局在させるのを平行して行い抗HB-EGF-CTF-N抗で共局在を解析した。その結果、抗HB-EGF-CTF-N抗体はトランスフェリン受容体と共局在した。このことから、HB-EGF-CTFはshedding後にrecycling eondosomeを通過することが予測された。そこで、recycling eondosomeへの小胞輸送反応において重要な反応を担う低分子量G-蛋白質Rab5に焦点を絞り、Rab5のdominant negative formの発現による機能抑制、Rab5特異的siRNAによる遺伝子ノックダウンにより、HB-EGF-CTFのER/核膜に移行について解析を進めている。
Membrane type growth factor EGF is responsible for the production of shedding and C-terminal fragment (CTF) on the cell membrane surface. EGF and Amphiregulin-CTF analysis results, HB-EGF-CTF, Amphiregulin-CTF and ER/nuclear membrane migration, aggregation In this study, we analyzed the factors that regulate the migration of ER and nuclear membrane after Shedding Development of antibodies (anti-HB-EGF-CTF-N antibodies) specific to HB-EGF-CTF termini during molecular mechanism analysis of HB-EGF-CTF nuclear migration. Western blot analysis confirmed that the anti-HB-EGF-CTF-N antibody recognized the full length of HB-EGF and the shedding of HB-EGF-CTF-N. Then anti-HB-EGF-CTF-N antibody was used to detect HT1080 cells. Shedding inducer non-existent, anti-HBEGF-CTF-N antibody positive, immunostaining, ER/nuclear membrane staining positive after Shedding inducer treatment for 1 time TPA treatment time is shortened, and the same staining process is performed in the cell. In addition, the anti-HB-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-HB-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-HB-EGF-CTF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF- The results showed that anti-HB-EGF-CTF-N antibody was found in the receptor. HB-EGF-CTF is used to recycle oncosome after shedding. In addition, the recycling oncosome plays an important role in the cellular transport reaction, such as the focus of low molecular weight G-protein Rab5, the functional inhibition of the development of Rab5's dominant negative form, the analysis of Rab5-specific siRNA, HB-EGF-CTF and ER/nuclear membrane migration.

项目成果

期刊论文数量(24)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Induction of keratinocyte migration via transactivation of the epidermal growth factor receptor by the antimicrobial peptide LL-37
  • DOI:
    10.4049/jimmunol.175.7.4662
  • 发表时间:
    2005-10-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.4
  • 作者:
    Tokumaru, S;Sayama, K;Hashimoto, K
  • 通讯作者:
    Hashimoto, K
The mechanism of cleavage of EGFR ligands induced by inflammatory cytokines in gastric epithelial cells ; ADAM10 mediates IL-8-induced EGFR transactivation.
炎症细胞因子诱导胃上皮细胞EGFR配体裂解的机制;
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tanida;S.
  • 通讯作者:
    S.
Ectodomain shedding of membrane-anchored heparin-binding EGF like growthfactor and subcellular localization of the C-terminal fragment in a cell cycle
膜锚定肝素结合 EGF 样生长因子的胞外域脱落和细胞周期中 C 端片段的亚细胞定位
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Toki;F. et al.
  • 通讯作者:
    F. et al.
Charged amino acid residues in the cytoplamic domain of proHB-EGF regulate its distribution and interaction with PLZF.
proHB-EGF 胞质结构域中的带电氨基酸残基调节其分布以及与 PLZF 的相互作用。
ADAM-binding protein Eve-1 is required for ectodomain shedding of EGF receptor ligands
ADAM 结合蛋白 Eve-1 是 EGF 受体配体胞外域脱落所必需的
  • DOI:
  • 发表时间:
    2004
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tanaka;M.et al.
  • 通讯作者:
    M.et al.
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東山 繁樹其他文献

血管内皮細胞におけるCUL3の機能解析
CUL3在血管内皮细胞中的功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2015
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    坂上 倫久;藤崎 亜耶子;中城 公一;浜川 裕之;泉谷 裕則;東山 繁樹
  • 通讯作者:
    東山 繁樹
Autoimmune diseases and infections: controversial issues
自身免疫性疾病和感染:有争议的问题
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    上谷 晃由;井上 博文;東山 繁樹;Baio P
  • 通讯作者:
    Baio P
月刊「細胞」2018年 11月号
《细胞》月刊2018年11月号
  • DOI:
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    坂上倫久;前川大志;藤崎亜耶子;中山寛尚;泉谷裕則;東山 繁樹
  • 通讯作者:
    東山 繁樹
大動脈弁石灰化に寄与する弁間質細胞の特性解析
导致主动脉瓣钙化的瓣膜间质细胞的特征
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    坂上倫久、菅野 果歩;濱口 美香;浪口 謙治;青野 潤;倉田 美恵;増本 純也;東山 繁樹;泉谷 裕則
  • 通讯作者:
    泉谷 裕則
増殖因子によるRibosomal S6 Kinase 2 (RSK2)の細胞内局在制御機構
生长因子对核糖体 S6 激酶 2 (RSK2) 的亚细胞定位控制机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    福田 信治;福田 尚代;Deborah A. Lannigan;東山 繁樹
  • 通讯作者:
    東山 繁樹

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受容体型チロシンキナーゼHERの新規活性抑制機構に基づく創薬とがん治療応用
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  • 财政年份:
    2024
  • 资助金额:
    $ 2.05万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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  • 批准号:
    21K18262
  • 财政年份:
    2021
  • 资助金额:
    $ 2.05万
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    Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
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RhoB-CNKSR1 复合物对 HER1/2 受体酪氨酸激酶的调节
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    21H02763
  • 财政年份:
    2021
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    $ 2.05万
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    13216057
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    2001
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    $ 2.05万
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    11139239
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    1999
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    $ 2.05万
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    08780586
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    1996
  • 资助金额:
    $ 2.05万
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    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
膜アンカー型細胞増殖因子の変換機構の解析
膜锚定细胞生长因子转化机制分析
  • 批准号:
    07780513
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    1995
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    $ 2.05万
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  • 财政年份:
    1994
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    $ 2.05万
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    06281236
  • 财政年份:
    1994
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    $ 2.05万
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    63790395
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    1988
  • 资助金额:
    $ 2.05万
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EGFファミリー分子のmRNA安定化機構解析とその応用
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  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 2.05万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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知道了