权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

膜蛋白質の核輸送を規定する因子の同定

膜蛋白核转运调节因子的鉴定

基本信息

批准号：
16659073
负责人：
東山繁樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659073/
关键词：
膜型増殖因子 EGFファミリー HB-EGF amphiregulin recycling endosome 小胞輸送 Rab CTF signal neuclear import membrane protein endocytosis vesicle transport shedding

项目摘要

膜型増殖因子EGFファミリーメンバーは細胞膜表面でsheddingを受け、カルボキシ末端断片(C-terminal fragment ; CTF)を産生する。EGFファミリーメンバーのHB-EGFとamphiregulinのCTFについて解析をした結果、HB-EGF-CTF, amphiregulin-CTFともにER/核膜に移行し、集積した。本研究ではShedding後に細胞膜に残る膜ペプチドCTFがいかにしてER/核膜に移行するのか、またそれを規定する因子は何かを解析した。HB-EGF-CTF核移行の分子機構解析 sheddingによって初めて露出するHB-EGF-CTFアミノ末端を特異的に認識する抗体(抗HB-EGF-CTF-N抗体)を開発した。Western blot解析からこの抗HB-EGF-CTF-N抗体は、HB-EGF全長は認識せず、sheddingによって産生されるHB-EGF-CTFを特異的に認識することを確認した。次に抗HB-EGF-CTF-N抗体を用いてHB-EGF発現HT1080細胞を免疫染色した。Shedding誘導剤非存在化では抗HB-EGF-CTF-N抗体陽性は認められなかったが、Shedding誘導剤であるTPAで処理1時間後の免疫染色で、ER/核膜の染色陽性像を得た。更にTPAで処理時間を短縮し、同様に染色を行い細胞内局在を解析したところ、recycling eondosomeと思われる領域を染色した。そこでrecycling eondosomeのマーカーとなるトランスフェリン受容体を標識トランスフェリンで細胞内に取り込ませ、recycling eondosomeに局在させるのを平行して行い抗HB-EGF-CTF-N抗で共局在を解析した。その結果、抗HB-EGF-CTF-N抗体はトランスフェリン受容体と共局在した。このことから、HB-EGF-CTFはshedding後にrecycling eondosomeを通過することが予測された。そこで、recycling eondosomeへの小胞輸送反応において重要な反応を担う低分子量G-蛋白質Rab5に焦点を絞り、Rab5のdominant negative formの発現による機能抑制、Rab5特異的siRNAによる遺伝子ノックダウンにより、HB-EGF-CTFのER/核膜に移行について解析を進めている。

Membrane type growth factor EGF is responsible for the production of shedding and C-terminal fragment (CTF) on the cell membrane surface. EGF and Amphiregulin-CTF analysis results, HB-EGF-CTF, Amphiregulin-CTF and ER/nuclear membrane migration, aggregation In this study, we analyzed the factors that regulate the migration of ER and nuclear membrane after Shedding Development of antibodies (anti-HB-EGF-CTF-N antibodies) specific to HB-EGF-CTF termini during molecular mechanism analysis of HB-EGF-CTF nuclear migration. Western blot analysis confirmed that the anti-HB-EGF-CTF-N antibody recognized the full length of HB-EGF and the shedding of HB-EGF-CTF-N. Then anti-HB-EGF-CTF-N antibody was used to detect HT1080 cells. Shedding inducer non-existent, anti-HBEGF-CTF-N antibody positive, immunostaining, ER/nuclear membrane staining positive after Shedding inducer treatment for 1 time TPA treatment time is shortened, and the same staining process is performed in the cell. In addition, the anti-HB-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-HB-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-HB-EGF-CTF-CTF-N anti-HB-EGF-CTF-EGF-CTF- The results showed that anti-HB-EGF-CTF-N antibody was found in the receptor. HB-EGF-CTF is used to recycle oncosome after shedding. In addition, the recycling oncosome plays an important role in the cellular transport reaction, such as the focus of low molecular weight G-protein Rab5, the functional inhibition of the development of Rab5's dominant negative form, the analysis of Rab5-specific siRNA, HB-EGF-CTF and ER/nuclear membrane migration.