膜蛋白質の核輸送を規定する因子の同定

膜蛋白核转运调节因子的鉴定

• 批准号: 16659073
• 负责人: 東山 繁樹
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659073/
• 关键词: 膜型増殖因子; EGFファミリー; HB-EGF; amphiregulin; recycling endosome; 小胞輸送; Rab; CTF signal; neuclear import; membrane protein; endocytosis; vesicle transport; shedding

膜型増殖因子EGFファミリーメンバーは細胞膜表面でsheddingを受け、カルボキシ末端断片(C-terminal fragment ; CTF)を産生する。EGFファミリーメンバーのHB-EGFとamphiregulinのCTFについて解析をした結果、HB-EGF-CTF, amphiregulin-CTFともにER/核膜に移行し、集積した。本研究ではShedding後に細胞膜に残る膜ペプチドCTFがいかにしてER/核膜に移行するのか、またそれを規定する因子は何かを解析した。HB-EGF-CTF核移行の分子機構解析 sheddingによって初めて露出するHB-EGF-CTFアミノ末端を特異的に認識する抗体(抗HB-EGF-CTF-N抗体)を開発した。Western blot解析からこの抗HB-EGF-CTF-N抗体は、HB-EGF全長は認識せず、sheddingによって産生されるHB-EGF-CTFを特異的に認識することを確認した。次に抗HB-EGF-CTF-N抗体を用いてHB-EGF発現HT1080細胞を免疫染色した。Shedding誘導剤非存在化では抗HB-EGF-CTF-N抗体陽性は認められなかったが、Shedding誘導剤であるTPAで処理1時間後の免疫染色で、ER/核膜の染色陽性像を得た。更にTPAで処理時間を短縮し、同様に染色を行い細胞内局在を解析したところ、recycling eondosomeと思われる領域を染色した。そこでrecycling eondosomeのマーカーとなるトランスフェリン受容体を標識トランスフェリンで細胞内に取り込ませ、recycling eondosomeに局在させるのを平行して行い抗HB-EGF-CTF-N抗で共局在を解析した。その結果、抗HB-EGF-CTF-N抗体はトランスフェリン受容体と共局在した。このことから、HB-EGF-CTFはshedding後にrecycling eondosomeを通過することが予測された。そこで、recycling eondosomeへの小胞輸送反応において重要な反応を担う低分子量G-蛋白質Rab5に焦点を絞り、Rab5のdominant negative formの発現による機能抑制、Rab5特異的siRNAによる遺伝子ノックダウンにより、HB-EGF-CTFのER/核膜に移行について解析を進めている。

Membrane type raised colonization factor EGF フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー は membrane surface で shedding を け, カ ル ボ キ シ terminal fragment (C - terminal fragments; the CTF) を produce す る. EGF フ ァ ミ リ ー メ ン バ ー の HB EGF - と amphiregulin の CTF に つ い て parsing を し た results, HB EGF - the CTF, amphiregulin - the CTF と も に ER/nuclear membrane に transitional し, set product し た. This study で は に membranes に residual る film after Shedding ペ プ チ ド CTF が い か に し て ER/nuclear membrane に transitional す る の か, ま た そ れ を rules す る factor は what か を parsing し た. HB EGF - the CTF nuclear migration の molecular institutions shedding に よ っ て early め て reveal す る HB EGF - the CTF ア ミ ノ end を specific に know す る antibody (anti HB EGF - the CTF - N) antibodies を open 発 し た. Western blot parsing か ら こ の HB EGF - resistant CTF - N antibody は length, HB EGF は know せ ず, shedding に よ っ て produce さ れ る HB EGF - the CTF を specific に know す る こ と を confirm し た. The に anti-hb-EGf-ctF-n antibody を was used to produce HT1080 cells with て てHB-EGF を immunostaining た. The non-existence of the Shedding inducer で で positive anti-HB-EGF-ctF-n antibody められな is recognized as められな である ったが, and after treatment with the Shedding inducer であるTPAで for 1 time, the positive <s:1> immunostaining で and ER/ nuclear membrane <s:1> staining image を is obtained as た. More に TPA で 処 manage time を shortening し, with others in line に dyeing を い cells inside bureau in analytical し を た と こ ろ, process eondosome と think わ れ る field を dyeing し た. そ こ で process eondosome の マ ー カ ー と な る ト ラ ン ス フ ェ リ ン by let body を logo ト ラ ン ス フ ェ リ ン で intracellular に take り 込 ま せ, process eondosome に bureau in さ せ る の を parallel し て line い HB EGF - resistant CTF -n resistance で total bureau in analytical し を た. Youdaoplaceholder0 そ result, anti-Hb-EGf-ctF-n antibody トラ トラ スフェリ スフェリ と receptor と co-localized in <s:1> た. こ の こ と か ら, HB EGF - the CTF は に after shedding process eondosome を through す る こ と が be さ れ た. そ こ で, process eondosome へ の vesicular transport against 応 に お い て important な anti 応 を bear う low molecular weight protein G - Rab5 に focus stranded を り, Rab5 の dominant negative Form の 発 now に よ る function inhibition, Rab5 specific siRNA に よ る posthumous son 伝 ノ ッ ク ダ ウ ン に よ り, HB EGF - the CTF の ER/nuclear membrane に transitional に つ い て parsing を into め て い る.

项目成果

Induction of keratinocyte migration via transactivation of the epidermal growth factor receptor by the antimicrobial peptide LL-37

• DOI: 10.4049/jimmunol.175.7.4662
• 发表时间: 2005-10-01
• 期刊: JOURNAL OF IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Tokumaru, S;Sayama, K;Hashimoto, K
• 通讯作者: Hashimoto, K

The mechanism of cleavage of EGFR ligands induced by inflammatory cytokines in gastric epithelial cells ; ADAM10 mediates IL-8-induced EGFR transactivation.

炎症细胞因子诱导胃上皮细胞EGFR配体裂解的机制；

• 发表时间: 2004
• 期刊: Gastroenterology. 127
• 作者: Tanida;S.
• 通讯作者: S.

Ectodomain shedding of membrane-anchored heparin-binding EGF like growthfactor and subcellular localization of the C-terminal fragment in a cell cycle

膜锚定肝素结合 EGF 样生长因子的胞外域脱落和细胞周期中 C 端片段的亚细胞定位

• 发表时间: 2005
• 期刊: J. Cell. Physiol. 202
• 作者: Toki;F. et al.
• 通讯作者: F. et al.

Charged amino acid residues in the cytoplamic domain of proHB-EGF regulate its distribution and interaction with PLZF.

proHB-EGF 胞质结构域中的带电氨基酸残基调节其分布以及与 PLZF 的相互作用。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 320
• 作者: Nanba;D.
• 通讯作者: D.

ADAM-binding protein Eve-1 is required for ectodomain shedding of EGF receptor ligands

ADAM 结合蛋白 Eve-1 是 EGF 受体配体胞外域脱落所必需的

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279
• 作者: Tanaka;M.et al.
• 通讯作者: M.et al.