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Development of disease-specific protein-targeting technology

疾病特异性蛋白靶向技术的开发

基本信息

批准号：
21K18262
负责人：
東山繁樹
金额：
$ 16.64万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

遺伝子解析技術の簡易・高速化により、様々な疾患特異的な遺伝子変異が明らかになる中、その変異遺伝子によって作られる変異タンパク質を標的とする治療薬開発が課題となっている。通常、私たちの体には、タンパク質を一定量に保ったり、品質を管理したりするシステムとしてユビキチン・プロテアソームによるタンパク質分解システムがある。このシステムの一つを、任意に標的としたい変異タンパク質に指向性を持つようにする基質指向性変換モジュレーターを開発できれば、変異タンパク質の蓄積や異常活性化・不活性化を防ぐことができる。本研究では、膵がん、肺がんや大腸がんで高頻度に認められるK-Ras G12変異体３種(K-RasG12D/V/C)を対象事例として、K-RasG12D/V/Cを特異的に分解するCUL3型ユビキチンE3リガーゼ(CUL3 UbE3)システムを基盤とした基質指向性変換モジュレーターをDNAアプタマーで開発しこれを応用することで上記がん細胞の増殖を阻止する。これにより、疾患特異的変異タンパク質を任意に標的・分解する共通技術プラットホームを提案・創出し、その有用性と汎用性を示し、実用化を目指す。初年度の結果を踏まえ、WT担持磁気ビーズを用いたネガティブセレクション（カウンターセレクション）を採用した改良版SELEXの16ラウンド終了後に数種類の配列に濃縮できた。そこで、得られた各配列を有するDNAを化学合成し、磁気ビーズ、G12D、WT、ビオチン化タンパク質コントロールに対する結合活性を調べた。その結果、G12D変異体に特異的ではないもののK-Rasに特異的に結合するDNAアプタマー「C&A2」を同定した。

The goal of simplifying and speeding up gene analysis techniques for disease-specific gene mutations is to develop a therapeutic approach to gene mutation. Usually, the quality of the product is guaranteed by a certain amount, and the quality of the product is managed by a certain amount. The property of the matrix is changed to the property of the matrix. The property of the matrix is changed to the property of the matrix. The property of the matrix is changed to the property of the matrix. In this study, three K-Ras G12 variants (K-RasG 12 D/V/C) were identified with high frequency and K-RasG12D/V/C was specifically decomposed into CUL3 UbE3, which is a substrate oriented transformation of DNA. This is a common technology proposal, creation, usefulness, and application direction for disease-specific diversity, quality, and accessibility. The results of the first year were as follows: WT supported the magnetic field and used the modified version of SELEX to condense the number of types after the end of the year The chemical synthesis of DNA and the binding activity of G12D and WT are regulated. As a result, G12D is heterogeneous-specific, and K-Ras is heterogeneous-specific. DNA is heterogeneous-specific, and C&A2 is heterogeneous-specific.