C型肝炎ウイルス感染による肝線維化の分子生物学的解析

丙型肝炎病毒感染引起的肝纤维化的分子生物学分析

• 批准号: 16659120
• 负责人: 加藤 宣之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659120/
• 关键词: HCV-O; Stellate細胞; HuH-7細胞; TGF-β; CTGF; PH5CH8細胞; サブジェノミックレプリコン; 全長HCV RNA複製細胞

本年度は昨年度に樹立した遺伝子型1bのHCV-O株由来の全長HCV RNA複製細胞(O細胞)をインターフェロンで処理することによりHCV RNAを排除した治癒細胞(Oc細胞)を樹立した。Oc細胞はHCV RNAを含まず、O細胞と細胞のバックグラウンドが同じため、HCV RNA複製の有無による宿主細胞の線維化関連因子への影響を検討できる良い材料である。さらに、線維化に関連している宿主遺伝子としてCTGF (Connective Tissue Growth Factor)に着目し、CTGFのプロモーター領域をクローニングした。CTGFのプロモーター領域を、ルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだプラスミドを作成し、レポーターアッセイ系を構築した。CTGFはTGF-βにより産生され、肝線維化の原因となるcollagenを産生する。また、O細胞およびOc細胞でのTGF-βの産生についてreal time PCRでの定量を、現在試みている。また、肝線維化はアルコール、鉄などにより促進されるためこれらによる刺激を加えた時に産生されるTGF-βの定量も行っている。今後の計画として、ヒト肝癌細胞株HuH-7由来のO細胞およびOc細胞をヒトstellate細胞と共培養することで、1)構築したCTGFプロモーターのアッセイ系を用いたstellate細胞におけるCTGF発現の検討、2)線維化の最終産物であるcollagenのstellate細胞での発現の検討を予定している。さらに、アルコール、鉄刺激によりこれらの宿主因子のstellate細胞での発現量を検討したい。本年度は全長HCV RNAを複製するヒト肝細胞(O細胞)とstellate細胞との共培養系を構築することができた。今後この共培養系を用いてHCVの肝線維化に及ぼす分子生物学的機構を解明し、さらに肝線維化を抑制する薬剤への応用へと研究を発展させていきたい。

This year's annual に は yesterday set し た heritage 伝 sub-type の HCV - 1 b O plant origin の full-length HCV RNA replication cell (O) を イ ン タ ー フ ェ ロ ン で 処 Richard す る こ と に よ り を exclude HCV RNA し た cure cells (Oc) を set し た. は HCV RNA を Oc cells contain ま ず, O cells と の バ ッ ク グ ラ ウ ン ド が with じ た め, HCV RNA replication の presence of に よ る host cell の line dimensions masato even factor へ の influence を beg で 検 き る good い material で あ る. さ ら に, line d に masato even し て い る host legacy 伝 son と し て CTGF (Connective Tissue Growth Factor) に mesh し, CTGF の プ ロ モ ー タ ー field を ク ロ ー ニ ン グ し た. CTGF の プ ロ モ ー タ ー を, ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 の upper に group み 込 ん だ プ ラ ス ミ ド を し, consummate レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ department を build し た. CTGF TGF-βによ され is produced, and the causes of liver line dimensionalization are となるcollagenを is produced する. ま た, O cell お よ び Oc cells で の TGF - beta の produce に つ い て real time PCR で の quantitative を, now try み て い る. ま た, liver line d は ア ル コ ー ル objects, iron な ど に よ り promote さ れ る た め こ れ ら に よ る stimulus を plus え た に generate さ れ る TGF - beta の quantitative も line っ て い る. Future の project と し て, ヒ ト liver cancer cell lines HuH - 7 origin の O cells お よ び Oc cells を ヒ ト と stellate cells co-culture す る こ と で, 1) build し た CTGF プ ロ モ ー タ ー の ア ッ セ を イ department with い た stellate cells に お け る CTGF 発 の now beg, 2) line d の 検 end product で あ る collagen <s:1> stellate cells で で present <s:1> を determine を て る る る る. Youdaoplaceholder0, ア ア コ コ コ さらに, iron stimulation によ コ れら, <s:1> host factor <e:1> stellate cells で で occurrence amount を検 to attack た た さらに. This year は を full-length HCV RNA replication す る ヒ ト hepatocyte cells (O) と stellate cells と の co-culture system を build す る こ と が で き た. Co-culture system in the future こ の を with い て HCV の liver line d に and ぼ す molecular biology institutions を interpret し, さ ら に liver line dimensions を inhibit す る 薬 tonic へ の 応 with へ と research を 発 exhibition さ せ て い き た い.

项目成果

Genetic variation and dynamics of hepatitis C virus replicons in long-term cell culture

• DOI: 10.1099/vir.0.80479-0
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Kato, N;Nakamura, T;Shimotohno, K
• 通讯作者: Shimotohno, K

Efficient replication of a full-length hepatitis C virus genome, strain O, in cell culture, and development of a luciferase reporter system

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.02.138
• 发表时间: 2005-04-22
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Ikeda, M;Abe, K;Kato, N
• 通讯作者: Kato, N