C型肝炎ウイルスの細胞指向性の解析

丙型肝炎病毒的细胞嗜性分析

• 批准号: 09670324
• 负责人: 加藤 宣之
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09670324/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 細胞指向性; 持続感染培養細胞; RT-PCR法; HCV遺伝子

3種類のHCVタイプ(I,II及びIII)が存在する血清1B-2をクローン化ヒト肝細胞(PH5CHl,PH5CH7,PH5CH8)とクローン化ヒトT細胞(MT-2A,MT-2B,MT-2C)に添加し、経時的にどのようなHCV分子種が増加してくるかを分子マーカーとして超可変領域1(HVRl)を解析することにより検討した結果、HCV感染後2-3週間の間に、MT-2細胞由来の3クローンではタイブIのHVRlを持つHCVが主要なHCV分子種となり、PH5CH細胞クローンではタイフIIのHVRlを持つHCVが主要なHCV分子種になっていることが分かり、昨年度報告した。この結果は、血清1B-2には肝細胞指向性とT細胞指向性のHCVが含まれていることを示唆しており、それと同時に細胞指向性を決定している因子がウイルス遺伝子側にあることも示唆している。分子マーカーとして用いたHVRl以外にこのような細胞指向性決定領域が存在していることが予想されたことから、本年度はタイブIとタイブII9HVRlを含むHCV遺伝子をクローン化して、複数のクローンについて塩基配列を決定して比較検討を行った。解析領域としてはHCV遺伝子の構造領域に黒点をあて、HCV感染細胞から得られた総RNAを用いて5'非翻訳領域からNS2領域までの約3.4kbをRT-nested PCRで増幅し、MT-2C細胞からタイブIのHVR1を持つ3個のcDNAクローンを、PH5CH7細胞からタイプIIのHVRlを持つ3個のcDNAクローンをそれぞれ得た。MT-2CA胞及びPH5CH7細胞から得た3個のcDNAクローン間の塩基配列の相同性はそれぞれ99.6-99.7%,98.1-98.8%、推定アミノ酸配列の相同性はそれぞれ99.2-99.3%,98.4-99.0%であり、タイプ間では均一性が高いことが分かった。すべてのcDNAクローンにおいてCysの位置やN-糖鎖付加部位も保存されていた。タイブIとタイプIIのコンセンサスアミノ酸配列を比較すると、1008アミノ酸のうち37箇所異なることが分かった。5'非翻訳領域の塩基配列には違いがなかったが、コア、El.E2、p7及びNS2をコードする領域にそれぞれl、3、24、1及び8アミノ酸の違いが認められた。E2における24アミノ酸のうち14アミノ酸はHVRlに局在していた。以前報告した別のHCV陽性血清1B-lを添加したMT-2C細胞から得られたHCV遺伝子の推定アミノ酸配列をT細胞指向性と考え、今回得られたアミノ酸配列と比較した結果、11アミノ酸(コア、E2、P7及びNS2をコードする領域にそれぞれ1、3、1及び6アミノ酸)異なることが分かった。これらのうちどのアミノ酸が細胞指向性を規定しているかを今後検討する必要がある。

3 kinds の HCV タ イ プ (I, II and III び) が す る serum 1 b - 2 を ク ロ ー ン change ヒ ト liver cells (PH5CHl PH5CH7, PH5CH8) と ク ロ ー ン change ヒ ト T cells (MT - 2 a, MT - 2 b, MT - 2 c) に add し, 経 に ど の よ う な HCV molecules of が raised plus し て く る か を molecular マ ー カ ー と し て super can 1 (HVRl) - field analytical す を る こ と に よ り beg し 検 た results, HCV infection between 2-3 weeks after の に, MT - 2 cell origin の 3 ク ロ ー ン で は タ イ ブ I の HVRl を hold つ な HCV molecular main types of HCV が と な り, PH5CH cell ク ロ ー ン で は タ イ フ II The <s:1> HVRlを holds <s:1> HCVが, the main なHCV molecular species になって る る とが とが, the とが branch が, the last year 's report た た. こ の results は, serum 1 b - 2 に は hepatocellular directivity と T cells directivity の HCV が containing ま れ て い る こ と を in stopping し て お り, そ れ と に cells at the same time directivity を decided し て い る factor が ウ イ ル ス heritage 伝 son side に あ る こ と も in stopping し て い る. Molecular マ ー カ ー と し て in い た HVRl outside に こ の よ う な cell directional decision domains exist が し て い る こ と が to think さ れ た こ と か ら, this year's は タ イ ブ I と タ イ ブ II9HVRl を contain traces of む HCV 伝 son を ク ロ ー ン change し て, plural の ク ロ ー ン に つ い て salt base with column を decided し beg を line っ て compare 検 た. Analytical field と し て は HCV heritage 伝 son の tectonic domain に black point を あ て, HCV infection cell か ら have ら れ た 総 RNA を with い て 5 'non turn 訳 field か ら NS2 field ま で の is about 3.4 KB を RT - nested PCR で raised し, MT - 2 c cells か ら タ イ ブ I の HVR1 を hold つ three の cDNA ク ロ ー ン を, PH5CH7 cell か ら タ イ プ II の HVRl を hold つ three の cDNA ク ロ ー ン を そ れ ぞ れ た. MT - 2 ca cell and び PH5CH7 cells か ら have た three の cDNA ク ロ ー ン の between salt base with column の identity は そ れ ぞ れ 99.6 99.7%, 98.1 98.8%, presumption ア ミ ノ acid with column の identity は そ れ ぞ れ 99.2 99.3%, 98.4 99.0% で あ り, タ イ プ between で は uniformity Youdaoplaceholder0 high が とが score った った. Youdaoplaceholder0 cDNA ロ ロ にお にお にお て てCys <s:1> position や n-glycosylation site すべて preservation されて た た た. タ イ ブ I と タ イ プ II の コ ン セ ン サ ス ア ミ ノ acid with column を compare す る と, 1008 ア ミ ノ acid の う ち by 37 different な る こ と が points か っ た. 5 'non turn 訳 field の salt base with column に は violations い が な か っ た が, コ ア, El, E2, p7 and び NS2 を コ ー ド す る field に そ れ ぞ れ l, 3, 24, 1 and 8 ア び ミ ノ acid の violations い が recognize め ら れ た. E2 に お け る 24 ア ミ ノ acid の う ち 14 ア ミ ノ acid は HVRl に bureau in し て い た. Previously reported し た don't の HCV positive serum 1 b - l を add し た MT - 2 c cells か ら have ら れ た HCV heritage 伝 son の presumption ア ミ ノ acid with column を t-cell directivity と え test, today back to ら れ た ア ミ ノ acid with column と compare し た results, 11 ア ミ ノ acid (コ ア, E2, P7 and び NS2 を コ ー ド す る field に そ れ ぞ れ 1, 3, 1 and び6ア ノ ノ acids are different from なる った とが and った. こ れ ら の う ち ど の ア ミ ノ acid が cell directivity を rules し て い る か を 検 for future す る necessary が あ る.

项目成果

T.Mizutani, N.Kato: "Detection of negative-stranded hepatitis C virus RNA using a novel strand-specific reverse transcription-polymerase chain reaction." Virus Research. (in press). (1998)

T.Mizutani、N.Kato：“使用新型链特异性逆转录聚合酶链式反应检测负链丙型肝炎病毒 RNA。”

M.Inudoh,N.Kato: "New monoclonal antibodies against a recombinant second envelope protein of hepatitis C virus." Microbiol.and Immunol.42. 875-877 (1998)

M.Inudoh、N.Kato：“针对丙型肝炎病毒重组第二包膜蛋白的新型单克隆抗体。”

K.Sugiyama, N.Kato: "Hepatitis C virus in pelvic lymph nodes and female reproductive organs." Japanese Journal of Cancer Research. 88. 925-927 (1997)

K.Sugiyama、N.Kato：“盆腔淋巴结和女性生殖器官中的丙型肝炎病毒。”

T.Mizutani,N.Kato: "Detection of negative-stranded hepatitis C virus RNA using a novel strand-specific reverse transcription-polymerase chain reaction." Virus Res.53. 209-214 (1998)

T.Mizutani，N.Kato：“使用新型链特异性逆转录聚合酶链式反应检测负链丙型肝炎病毒 RNA。”

M.Ikeda, N.Kato,: "Analysis of the cell tropism of HCV by using in vitro HCV-infected human lymphocytes and hepatocytes." Journal of Hepatology. 27. 445-454 (1997)

M.Ikeda、N.Kato，：“利用体外 HCV 感染的人淋巴细胞和肝细胞分析 HCV 的细胞趋向性。”