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C型肝炎ウイルスコア蛋白質の転写制御能に関する研究

丙型肝炎病毒核心蛋白转录调控能力的研究

基本信息

批准号：
11138266
负责人：
加藤宣之
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では肝発がんに関わっていることが示唆されているC型肝炎ウイルス(HCV)のコア蛋白質がどのような種類の遺伝子の転写調節に関わっているかを明らかにすることを目的として、HCVに高感受性を示すヒト培養肝PH5CH8細胞にHCVのコア蛋白質を発現させ、コア蛋白質の転写調節能に関して分子生物学的手法を用いて解析し、以下に示すような結果を得た。(1)HCV感染ヒト肝PH5CH8細胞により得たHCVコア蛋白質をコードしているcDNAを基にコア蛋白質を発現するベクターを構築した。(2)コア蛋白質発現ベクターをPH5CH8細胞などに導入後、磁気ビーズ標識法を用いて発現細胞の濃縮単離システムを確立した。この方法により、コア蛋白質発現細胞の精製度を80%以上に上昇させることができた。(3)216通りのプライマーセットを用いたディファレンシャルディスプレイ法を施行し、コア蛋白質により発現量が変動する6種類の遺伝子(mRNA export protein(RAE-1)、bcl-2 associated athanogen、histone2Aおよび未知の3クローン)を得た。(4)新たに開発した定量的RT-PCR法を用いて、コア蛋白質により発現量が変動する既知遺伝子の探索を行い、IL8とMET mRNAレベルの高進が認められたが、2倍以上変動するものは得られなかった。(5)cDNA発現アレイ(1176種類の既知遺伝子)を用いて、コア蛋白質により発現量が変動する既知遺伝子を探索した結果、VEGF前駆体のmRNA量の低下が観察された。(6)各種シグナル応答配列の下流にホタルルシフェラーゼ遺伝子をつないだレポータープラスミドを用いたアッセイシステムにより、コア蛋白質はインターフェロンにより誘導される2´-5´オリゴアデニル酸合成酵素遺伝子のプロモーターを活性化することを見い出した。現在、コア蛋白質によるこのプロモーターの活性化機構について解析中である。

In this study, hepatitis C virus infection (HCV), hepatitis C virus infection, hepatitis C virus infection, hepatitis C virus infection, The method of molecular biology is used to analyze the results of molecular biology. The results are shown below. (1) HCV infection caused PH5CH8 infection in the liver. The HCV protein was obtained. The protein was isolated from cDNA. (2) after the introduction of the PH5CH8 cell, the magnetic marker method is used to determine the location of the cell. The results showed that the precision of the cell was more than 80%, and the precision was higher than 80%. (3) the application of this method is based on the performance of mRNA export protein (RAE-1), bcl-2 associated athanogen, histone2A and so on. (4) the new RT-PCR method can be used to determine the quantity of protein and protein. It is not only known that there is a lot of research in the industry, but also that IL8 in met mRNA has improved its performance, and more than twice as much as it has. (5) the results of cDNA test (1176), protein test, test and test. (6) all kinds of equipment should be allocated to all kinds of equipment. They should be equipped with the following information: they should be used in all kinds of equipment. They should be used in the system. They should be used in the system. At present, there is an increase in the level of activity in the analysis of the mechanism.