C型肝炎ウイルス蛋白質の発現調節能と遺伝子不安定化能に関する研究

丙型肝炎病毒蛋白表达调控能力及基因失稳研究

• 批准号: 12213085
• 负责人: 加藤 宣之
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213085/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; レポーターアッセイシステム; 転写調節能; cDNA発現アレイ; コア蛋白質; マイクロサテライト不安定性; CAリピート; DNA修復

本研究ではHCV蛋白質の細胞内機能と肝発がんとの関係を明らかにすることを目的として、HCVコアおよびNS5A蛋白質の転写調節能や遺伝子不安定性に及ぼす影響を調べ、以下に示すような結果を得た。HCV蛋白質の転写調節能に関しては、HCV高感受性株であるヒト肝PH5CH8細胞を用いて、昨年度のコア蛋白質に引き続いて、NS5A蛋白質の発現により影響を受ける遺伝子群の解析を行い、Collagen type IV alpha-1,Zyxin related protein-1,Prothymosin alpha,RAF oncogene,Cytokeratin 18およびE2F-1 pRB-binding proteinの6種類の発現が高進していることを明らかにした。さらに、昨年度見い出したコア蛋白質による2′-5′オリゴアデニル酸合成酵素(OAS)遺伝子プロモーターの活性化についてさらに詳しく解析した。その結果、コア蛋白質による2′-5′OAS遺伝子プロモーターの活性化はinterferon処理によりさらに増強されることが分かった。また、この活性化はE1、E2、NS5A蛋白質を発現させた場合には認められず、活性化の程度は導入したコア蛋白質発現ベクターの量に比例していた。アミノ酸配列が異なる各種遺伝子型(1a,1b,2a,2bおよび3a)由来のコア蛋白質もこの遺伝子プロモーターを活性化した。2′-5′OAS遺伝子プロモーターの活性化は転写レベルで起こっていることがノーザンブロットにより確かめられた。さらに、内在性の2′-5′OAS遺伝子の活性化も同時に起こっていることが明らかとなった。2′-5′OAS遺伝子プロモーターの欠失変異体やinterferon stimulated response element(ISRE)の配列を有するレポータープラスミドを用いて解析したところ、コア蛋白質による2′-5′OAS遺伝子プロモーターの活性化はISREを介していることが示唆された。遺伝子不安定性に関しては、上記の肝細胞とレトロウイルスベクターによる発現系を用いて、ミスマッチ修復系に属するマイクロサテライト不安定化能に関する細胞レベルでのアッセイ系の開発を行い、実用的なシステムを得ることができた。この新たに開発したアッセイシステムを用いてHCV蛋白質がマイクロサテライト不安定性にどのような影響を与えるかを検討した結果、コア蛋白質の発現により、マイクロサテライト不安定性が増強される傾向にあることが分った。NS5A蛋白質の発現ではこのような現象は認められなかった。現在、この現象をさらに追究するとともに、他のDNA修復系のアッセイ系についても構築中である。

This study で は HCV proteins の と liver cell function 発 が ん と の masato を and Ming ら か に す る こ と を purpose と し て, HCV コ ア お よ び NS5A protein の planning write can regulate や heritage 伝 son labile に and ぼ す influence を べ, に shown below す よ う た を な results. HCV proteins の planning write can regulate に masato し て は, high HCV susceptibility strains で あ る ヒ を ト PH5CH8 liver cells with い て, yesterday's annual の コ ア protein に lead き 続 い て, NS5A protein の 発 now に よ り を by け る heritage 伝 subgroup の parsing を い, Collagen type IV Alpha-1,Zyxin related protein-1,Prothymosin alpha,RAF oncogene,Cytokeratin 18およびE2F-1 pRB-binding Six types of protein are present: が, high-level, て, る, <s:1>, とを, ら, に, た. さ ら に, yesterday see annual い し た コ ア protein に よ る 2 '- 5' オ リ ゴ ア デ ニ ル acid synthetase (OAS) posthumous son 伝 プ ロ モ ー タ ー の activeness に つ い て さ ら に detailed し く parsing し た. そ の results, コ ア protein に よ る traces of 2 '- 5' OAS 伝 son プ ロ モ ー タ ー の activeness は interferon 処 Richard に よ り さ ら に raised strong さ れ る こ と が points か っ た. ま た, こ の activeness は E1, E2, NS5A protein を 発 now さ せ た occasions に は recognize め ら れ ず, degree of activeness の は import し た コ ア protein 発 now ベ ク タ ー の quantity proportion に し て い た. ア ミ ノ acid with column が different な る various legacy 伝 subtypes (1 a and 1 b, 2 a, 2 b お よ び 3 a) origin の コ ア protein も こ の posthumous son 伝 プ ロ モ ー タ ー を activeness し た. Traces of 2 '- 5' OAS 伝 son プ ロ モ ー タ ー の activeness は planning write レ ベ ル で up こ っ て い る こ と が ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト に よ り か indeed め ら れ た. Youdaoplaceholder0, the internality of <s:1> 2 '-5' OAS remains 伝 offspring 伝 activation <e:1>, simultaneously に initiating <s:1> って る る とが とが ら となった となった となった となった となった る 2 '-5' OAS offspring 伝 subzyme プロモ タ タ タ <s:1> <s:1> lacking variant やinterferon stimulated response Element (ISRE) の match column を す る レ ポ ー タ ー プ ラ ス ミ ド を with い て parsing し た と こ ろ, コ ア protein に よ る traces of 2 '- 5' OAS 伝 son プ ロ モ ー タ ー の activeness は ISRE を interface し て い る こ と が in stopping さ れ た. Posthumous son 伝 labile に masato し て は, written の hepatocellular と レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に よ る 発 practice while department を い て, ミ ス マ ッ チ repair series に belongs す る マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト stabilization can not に masato す る cells レ ベ ル で の ア ッ セ イ started の 発 を い, be use な シ ス テ ム を must る こ と が で き た. Open new た こ の に 発 し た ア ッ セ イ シ ス テ ム を with い て HCV proteins が マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト labile に ど の よ う な influence を and え る か を beg し 検 た results, コ ア protein の 発 now に よ り, マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト labile が raised strong さ れ る tendency に あ る こ と が points っ た. The NS5A protein shows で, <s:1>, ような, ような and ような phenomena <e:1>, indicating められな, った and った. Now, the <s:1> <s:1> phenomenon をさらに is investigated for するとと <s:1> に に, and his <s:1> DNA repair system <e:1> アッセ アッセ is in the construction of に, に, て and て である.

项目成果

Ikeda,M.,Kato,N., et al.: "Characterization of antiviral activity of lactoferrin against hepatitis C virus infection in human cultured cells."Virus Res.. 66. 51-63 (2000)

Ikeda,M.,Kato,N., et al.：“乳铁蛋白对人类培养细胞中丙型肝炎病毒感染的抗病毒活性的表征。”Virus Res.. 66. 51-63 (2000)

Nozaki,A.,Kato,N., et al.: "A reliable internally controlled RT-nested PCR method for the detection of hepatitis C virus RNA."Acta Med.Okayama. 54. 253-257 (2000)

Nozaki,A.、Kato,N.等人：“一种可靠的内部控制 RT 巢式 PCR 方法，用于检测丙型肝炎病毒 RNA。”Acta Med.Okayama。

Naganuma,A.,Kato,N., et al.: "Activation of the interferon -inducible 2'-5'-oligoadenylate synthetase gene by hepatitis C virus core protein."J.Virol.. 74. 8744-8750 (2000)

Naganuma,A.,Kato,N., et al.：“丙型肝炎病毒核心蛋白激活干扰素诱导型 2-5-寡腺苷酸合成酶基因。”J.Virol.. 74. 8744-8750 (2000

Seki,S.,Akiyama,K., et al.: "The human gene for the regulatory factor 2 of the solute carrier family 9, iso form A3."J.Biochem.Mol.Biol.Biophys. (印刷中). (2001)

Seki, S.、Akiyama, K. 等人：“溶质载体家族 9 的调节因子 2 的人类基因，亚型 A3。”J.Biochem.Mol.Biol.Biophys。 (2001)

Kato,N.: "Genome of human hepatitis C virus (HCV)"Microbial & Comparative Genomics. (印刷中). (2001)

Kato, N.：“人类丙型肝炎病毒 (HCV) 基因组”微生物与比较基因组学（印刷中）。