ナノ粒子を用いた遺伝子治療法の開発

使用纳米粒子的基因治疗的发展

• 批准号: 16659279
• 负责人: 原 寿郎
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659279/
• 关键词: ナノ粒子; 遺伝子修復; 核内移行シグナル; スプライシング; 修飾オリゴヌクレオチド; 核移行シグナル

目的:核内へのオリゴヌクレオチド送達を効率化させるナノ粒子を開発し,標的遺伝子の変異修復またはスプライシング反応への介入を目的とする遺伝子治療への基盤技術を確立する.方法:SV40ラージT抗原由来の核内移行シグナル(NLS)と同一配列のペプチド(-PKKRKV)を付加させたN-イソプロピルアクリルアミド(NIPAA)を化学合成した.NLS-NIPAAとDNA両者を水溶液中で適当な混合比で混和させると径数十nmの複合体(ナノ粒子)を形成する.今回,NLS付加型NIPAAとオリゴヌクレオチド(ONT)を様々な重量比で混合させ,HeLa細胞に導入した.FITCでラベルした25-mer ONTの核内移行効率について蛍光顕微鏡を用いて観察し,2'-O-メチルRNAなどの修飾ONT導入後のアンチセンス(Bcl-xL/SプレmRNAの択一的スプライシング介入)効果についてはRT-PCRを行い,それぞれ市販のリポフェクション試薬との効率の差異を評価した.結果:窒素/リン酸比0.5-3でFITCラベルONTの細胞内集積が極大を示した.FITCシグナルの核内集積レベル(0.593±0.0706)は,従来のリポフェクション法(0.323±0.0585)を有意に上回っていた(平均値1.83倍;p<0.001).しかしながらBcI-xL/SプレmRNAの択一的スプライシング反応の介入効率については,リポフェクション法が有効であった.考察:NLS付加型NIPAAはDNAとの親和性が高い一方,細胞内で容易にDNAと解離しないことが今回の結果の原因と考えられた.現在,細胞内環境でDNAと解離する新規の核内送達キャリアーを開発中である.また本研究の過程で得られた,新たな遺伝子導入法に関する知見を国際雑誌に報告した(Sakai et al.,J Biotechnol,2006).

Objective: To establish the substrate technology of gene therapy for the development and repair of target gene in nuclear fusion gene delivery efficiency. Methods: The SV40-T antigen derived nuclear translocation complex (NLS) was chemically synthesized by adding NIPAA (NIPAA) to the same sequence.NLS-NIPAA DNA was mixed in aqueous solution at an appropriate mixing ratio to form a complex (NIPAA particle) with a diameter of tens of nm. In this paper,NLS additive NIPAA was introduced into HeLa cells by weight ratio.FITC was introduced into 25-mer ONTs and the nuclear migration efficiency was observed by light microscopy. 2'-O-RNA was modified by ONT.(Bcl-xL/S-protein mRNA is involved in the regulation of the gene expression system). The results show that RT-PCR can be used to evaluate the differences in the efficiency of different gene expression systems. Results: The intracellular accumulation of FITC in ONT was significantly higher than that of FITC in the range of 0.5-3. The intracellular accumulation of FITC in ONT was significantly higher than that of FITC in the range of 0.593±0.0706 (mean 1.83;p<0.001). The BcI-xL/S mRNA expression profile is very important for the prevention and treatment of BcI-xL/S. Investigation:NLS additive NIPAA DNA affinity is high, intracellular DNA dissociation is easy, and the reason for this result is examined. Now, the intracellular environment of DNA dissociation new rules of nuclear delivery, development. The process of this study has been described in detail, and the new gene introduction method has been reported in International Journal (Sakai et al., J Biotechnol,2006).

项目成果

Benign convulsion with mild gastroenteritis and benign familial infantile seizure.

良性惊厥伴有轻度胃肠炎和良性家族性婴儿惊厥。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Epilepsy Research 68
• 作者: M. Sanefuji;T. Hoshina;JR. Pipo-Deveza;Y. Ishizaki;M. Sanefuji;Takashi Ichiyama;Masafumi Sanefuji;楠原浩一;鳥巣浩幸;T. Ichiyama;M. Sanefuji;Masafumi Sanefuji;楠原 浩一;鳥巣 浩幸;Takaaki Ishizu;Megumi Takemoto;Hiroyuki Torisu;Yasunari Sakai;Yasunari Sakai
• 通讯作者: Yasunari Sakai

Persistent diffusion abnormalities in the brain stem of three children with mitochondrial diseases

三名患有线粒体疾病的儿童脑干持续弥散异常

• 发表时间: 2006
• 期刊: Am J Neuroradiol 27(9)
• 作者: Sakai Y;Ihara K;ほか4名
• 通讯作者: ほか4名

小児の成長・小児の発達:標準小児科学第6版

儿童生长/儿童发育：标准儿科学第六版

• 发表时间: 2006
• 作者: Takemoto M;et al.;Kariyazono et al.;Nagatomo et al.;Furuno et al.;Kimura et al.;Kawamura at al.;Sonoda et al.;原 寿郎
• 通讯作者: 原 寿郎

A novel R275X Mutation of the SLC25A15 gene in a Japanese patient with the HHH Syndrome.

日本 HHH 综合征患者的 SLC25A15 基因出现新的 R275X 突变。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Brain and Development 28
• 作者: M. Sanefuji;T. Hoshina;JR. Pipo-Deveza;Y. Ishizaki;M. Sanefuji;Takashi Ichiyama;Masafumi Sanefuji;楠原浩一;鳥巣浩幸;T. Ichiyama;M. Sanefuji;Masafumi Sanefuji;楠原 浩一;鳥巣 浩幸;Takaaki Ishizu;Megumi Takemoto;Hiroyuki Torisu;Yasunari Sakai;Yasunari Sakai;Masafumi Sanefuji;Hiroaki Tamura;Jun Muneuchi;T. Ishizu;M Takemoto;H. Torisu;Y. Sakai;Y. Sakai;H. Tamura;J. Muneuchi;Yasunari Sakai;Hiroyuki Torisu
• 通讯作者: Hiroyuki Torisu

Microarray analysis of human milk cells: persistent high expression of osteopontin during the lactation period

• DOI: 10.1111/j.1365-2249.2004.02549.x
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: CLINICAL AND EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.6
• 作者: Nagatomo, T;Ohga, S;Hara, T
• 通讯作者: Hara, T