次世代遺伝子治療の開発研究
次世代遺伝子治療の開発研究
下一代基因疗法的研究与开发
批准号：
14657187
负责人：
原 寿郎
金额：
$2.18万
依托单位：
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2002 至 2003
中文摘要
翻译
1.変異GFP発現細胞を用いた遺伝子修復モデル(原・續・中津・酒井)ナンセンス変異を有する変異GFP発現プラスミド,およびその変異点に特異的なアンチセンス・オリゴヌクレオチド(45-mer)をHeLa,HT-1080,およびMCF-7細胞に導入した.オリゴヌクレオチドの導入条件としてS化修飾やオリゴヌクレオチド濃度,さらにプラスミドとオリゴヌクレオチドの加温処理(アニーリング反応)などの効果について検討したが,GFP(緑色)蛍光を復帰した細胞は得られなかった.2.hprt遺伝子の点変異導入(原・酒井)ダイレクトシークエンス法によってHT-1080細胞が野生型hprt遺伝子を有すること,またこの細胞が6-チオグアニン感受性であることを確認した.そこでhprt遺伝子内の標的部位にナンセンス変異(R51X)を誘発させる,45-merのオリゴヌクレオチドを設計し,HT-1080細胞に導入した.HT-1080母数あたりの6-チオグアニン耐性コロニー数を計測し,オリゴヌクレオチドによるhprt遺伝子の部位特異的な変異頻度を求めた.その結果,オリゴヌクレオチド導入後のhprt遺伝子の変異頻度(3.3x10^<-6>)は,自然突然変異頻度(2.5x10^<-6>)と同一レベルであった.また形成されたコロニーについて塩基配列を確認したが,オリゴヌクレオチドによる部位特異的な点変異は認めらなかった.3.種々のオリゴヌクレオチドの合成(佐々木)6位をニトロ化した修飾グアニンを含有するオリゴヌクレオチド(DNA)を化学的に合成し,水溶液中で相補鎖DNAと二本鎖を形成させたところ,修飾グアニンの対側のシトシンが容易にチミンに変化することを見いだした.
英文摘要
1.変異GFP発現細胞を用いた遺伝子修復モデル(原・續・中津・酒井)ナンセンス変異を有する変異GFP発現プラスミド,およびその変異点に特異的なアンチセンス・オリゴヌクレオチド(45-mer)をHeLa,HT-1080,およびMCF-7細胞に導入した.オリゴヌクレオチドの導入条件としてS化修飾やオリゴヌクレオチド濃度,さらにプラスミドとオリゴヌクレオチドの加温処理(アニーリング反応)などの効果について検討したが,GFP(緑色)蛍光を復帰した細胞は得られなかった.2.hprt遺伝子の点変異導入(原・酒井)ダイレクトシークエンス法によってHT-1080細胞が野生型hprt遺伝子を有すること,またこの細胞が6-チオグアニン感受性であることを確認した.そこでhprt遺伝子内の標的部位にナンセンス変異(R51X)を誘発させる,45-merのオリゴヌクレオチドを設計し,HT-1080細胞に導入した.HT-1080母数あたりの6-チオグアニン耐性コロニー数を計測し,オリゴヌクレオチドによるhprt遺伝子の部位特異的な変異頻度を求めた.その結果,オリゴヌクレオチド導入後のhprt遺伝子の変異頻度(3.3x10^<-6>)は,自然突然変異頻度(2.5x10^<-6>)と同一レベルであった.また形成されたコロニーについて塩基配列を確認したが,オリゴヌクレオチドによる部位特異的な点変異は認めらなかった.3.種々のオリゴヌクレオチドの合成(佐々木)6位をニトロ化した修飾グアニンを含有するオリゴヌクレオチド(DNA)を化学的に合成し,水溶液中で相補鎖DNAと二本鎖を形成させたところ,修飾グアニンの対側のシトシンが容易にチミンに変化することを見いだした.
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Fumi Nagatsugi: "Selective cross-linking to the adenine of the TA interrupting site within the triple helix"Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 12・3. 487-489 (2002)
Fumi Nagatsugi：“与三螺旋内 TA 中断位点的腺嘌呤的选择性交联”《生物有机与药物化学快报》12・3（2002 年）。
Fumi Nagatsugi：“与三螺旋内 TA 中断位点的腺嘌呤的选择性交联”《生物有机与药物化学快报》12・3（2002 年）。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
Takehiko Inoue: "Contribution of the interleukin 4 gene to susceptibility to subacute sclerosing panecephalitis"Archive of Neurology. 59・5. 822-827 (2002)
Takehiko Inoue：“白细胞介素 4 基因对亚急性硬化性全脑炎的影响”，神经病学档案 59・5（2002 年）。
Takehiko Inoue：“白细胞介素 4 基因对亚急性硬化性全脑炎的影响”，神经病学档案 59・5（2002 年）。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
Torisu et al.: "Functional MxA promoter polymorphism associated with subacute sclerosing panencephalitis."Neurology. 62. 457-460 (2004)
Torisu 等人：“功能性 MxA 启动子多态性与亚急性硬化性全脑炎相关。”神经病学。
Torisu 等人：“功能性 MxA 启动子多态性与亚急性硬化性全脑炎相关。”神经病学。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
--
作者：
[]
通讯作者：
Nagatsugi et al.: "Efficient cross-linking reactions by functional nucleobases capable of in situ activation under neutral conditions."Nucleic Acids Res Suppl.. (3). 155-156 (2003)
Nagatsugi 等人：“通过能够在中性条件下原位激活的功能性核碱基进行有效的交联反应。”Nucleic Acids Res Suppl.. (3)。
Nagatsugi 等人：“通过能够在中性条件下原位激活的功能性核碱基进行有效的交联反应。”Nucleic Acids Res Suppl.. (3)。
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
Sasaki et al.: "Selective formation of stable triplexes including a TA or a CG interrupting site with new bicyclic nucleoside analogs (WNA)"J.Am.Chem.Soc.. 126. 516-528 (2004)
Sasaki 等人：“用新的双环核苷类似物 (WNA) 选择性形成包括 TA 或 CG 中断位点的稳定三链体”J.Am.Chem.Soc.. 126. 516-528 (2004)
Sasaki 等人：“用新的双环核苷类似物 (WNA) 选择性形成包括 TA 或 CG 中断位点的稳定三链体”J.Am.Chem.Soc.. 126. 516-528 (2004)
DOI：
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发表时间：
期刊：
影响因子：
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作者：
[]
通讯作者：
共 10 条
新しいヒト化疾患モデルマウスを用いたナノ遺伝子修復治療法の開発
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批准号：18659304
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项目类别：Grant-in-Aid for Exploratory Research
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资助金额：$2.11万
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财政年份：2006
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负责人：原 寿郎
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依托单位：
ナノ粒子を用いた遺伝子治療法の開発
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批准号：16659279
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项目类别：Grant-in-Aid for Exploratory Research
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资助金额：$2.05万
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财政年份：2004
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负责人：原 寿郎
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依托单位：
ダイオキシン毒性の客観的評価法の開発と、周産期・小児期疾患への影響の評価
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批准号：13027265
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项目类别：Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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资助金额：$1.41万
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财政年份：2001
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负责人：原 寿郎
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依托单位：
細胞表面機能分子に対するモノクロ-ナル抗体を用いての白血球機能異常の解析
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批准号：63570443
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项目类别：Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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资助金额：$0.96万
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财政年份：1988
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负责人：原 寿郎
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依托单位：
海外基金