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内分泌攪乱化学物質の生体に与える分子機構の解析

内分泌干扰物对生物体作用的分子机制分析

基本信息

批准号：
16659446
负责人：
井上正樹
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はテロメレースの触媒サブユニットであるhTERT promoterをクローニングし、hTERT転写発現機構を詳細に解析してきた。ダイオキシンによる遺伝子発煙誘導には遺伝子プロモーターに存在するTNGCGTGというコア配列からなるXRE(xenobiotic responsive element)と呼ばれるエンハンサー配列が必要であるが、hTERT promoter上には類似の配列が存在する。そこで我々は内分泌攪乱物質であるダイオキシジンがテロメレース発現に及ぼす影響について検討した。1 HeLa細胞にダイオキシン(2,3,7,8-tetrachlorodibenzzo-p-dioxin)を種々の濃度で作用させ、48時間および72時間後にテロメレース活性をTRAP assayにて計測したところコントロール群に比べ約1.5-2.5倍の明らかなテロメレース活性の上昇を認めた。HTERT mRNAの発現をRT-PCRで検討したところ、24〜48時間後にmRNAレベルの有意な上昇を認めた。2 3.2kbの全長のHTERT-promoter luciferase reporterを作製し、HeLa細胞にtransfect後、ダイオキシンを作用させ、48時間後にluciferase assayを行った。ダイオキシン作用によりhTERT promoterの転写活性が2-3倍に上昇した。hTERT promoterのdeletion mutantを作製し同様にluciferase assayを行ったところ、ダイオキシンに反応するpromoter領域を転写開始部上流の約800bpまでの領域に認めた。この領域はXRE類似配列を含んでいた。3 XRE類似配列に対するダイオキシンレセプターの結合をゲルシフトアッセイで検討中したところ、binding complexが検出された。このバンドはダイオキシンレセプター抗体の添加によりsupershiftすることから、特異的な結合であると確認された。4 結合部位に変異を導入したhTERT promoterを用いて、2と同様にluciferase assayを行ったところ、ダイオキシンによる転写活性化能はcancelされた。以上のことから、ダイオキシンがその特異的レセプターを通じてhTERT promoter上のXRE類似配列に作用することでhTERT転写活性を調節し、テロメレース活性化をもたらす分子機構を明らかにした。

We need to know how to use the catalyst, the hTERT promoter, the hTERT, and the mechanism to analyze the data. Please tell me that there is a TNGCGTG configuration. XRE (xenobiotic responsive element) requires a queue. It is necessary to have a configuration. The configuration on hTERT promoter is similar to the one that exists. I have an endocrine disorder. I have an endocrine disorder. 1 HeLa cell temperature response test (2, 3, 7, 7, 2, 3, 7, 7, 2, 2, 3, 7, 7, 4, 5, 4, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 5, 4, 4, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 5, 4, 4, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 5, 4, 4, 4, 4, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 7, 3, 7, 7, 3, 7, 7, 3, 7, 7, 3, 7, 7, 3, 7, 7, 7, 3, 7, 7, 7, 3, 7, 7, 7, 7, 7, 7 HTERT mRNA has seen that the RT-PCR alarm is down, and the mRNA alarm is intended to be registered after 24: 48. 2 the full-length HTERT-promoter luciferase reporter of 3.2kb is used for transfect, the cell of HeLa is used for transfect, and the effect of luciferase assay is changed after 48 hrs. The activity of hTERT promoter is 2-3 times higher than that of others. The hTERT promoter deletion mutant system works in conjunction with the luciferase assay communication system, and the promoter domain write start section is closed to 800bp users in the field. The domain XRE type seems to be matched with a list of "contains". 3. The XRE category seems to be configured with the combination of binding complex and binding complex. Please tell me that you need to add a supershift antibody to confirm that the antibody is specific to you. 4. In the combined part of the system, the hTERT promoter is used, and the luciferase assay is used in the same way as the other two. The activation energy is cancel. The XRE type on the hTERT promoter seems to be listed as if the function is related to the activation of the hTERT. The molecular mechanism is sensitive to the information.