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抗体の親和性成熟の分子機構のX線結晶学的研究

X射线晶体学研究抗体亲和力成熟的分子机制

基本信息

批准号：
05454564
负责人：
佐藤能雅
金额：
$ 3.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

抗原に対する抗体の親和性は体内の抗原の量に応じ時間とともに増大する。抗体の親和性の成熟と呼ばれるこの現象の分子機構をX線結晶解析による三次元構造知見に基づいて解明するため,親和性成熟の過程の抗体について解析に適したFabフラグメント結晶を得ることを目的とした。免疫応答の初期に産生されるN1G9,中期の3B44,および後期の3B62のマウスIgG_1抗ニトロフェノール(NP)抗体の培養法とFabの調製法を改良し,試料の大量精製法をまづ確立した。ついで,X線解析に適した結晶を得るための結晶化条件を最適化した。得られた3種のFab結晶はいずれも微小であったが,十分にX線解析が可能なことが判明した。このうちN1G9と3B44についてはFab結晶とNPとの複合体結晶のX線回折強度データを収集し,X線解析に着手した。3B62については,高分解能の回折斑点を与える結晶には双晶成分の回折斑点が認められた。そこで,結晶化と強度データの収集の方法をさらに改良することとしている。目的とした結晶化とX線結晶解析の見通しの確立の成果の学会発表を既に行い,現在投稿論文を準備中である。しかも,N1G9についてはFab自体と複合体の双方の結晶の解析を既に進め,構造の概略のみならずNPの結合部位の大まかな環境も知ることができた。3B44についても3A分解能で結晶中の分子配置を決定している。したがって,これらFab構造の詳細なX線解析が可能となり,親和性成熟の分子機構の研究は今後大いに進展するものと期待される。

The affinity of the antibody increases with time. The molecular mechanism of antibody affinity maturation and fusion is analyzed by X-ray crystallography. The three-dimensional structure is analyzed by X-ray crystallography. The antibody affinity maturation process is analyzed by X-ray crystallography. The culture method and Fab preparation method of IgG_1 anti-NP antibody were improved in the early stage of immune response, including N1G9, 3B44, 3B62 and 3B62. The mass purification method of sample was established. X-ray analysis was performed to optimize crystallization conditions. The three kinds of Fab crystals are very small and X-ray analysis is very possible. The X-ray reflection intensity of Fab crystals and NP complex crystals was collected and X-ray analysis was started. 3B62 The method of crystallization and strength aggregation is improved. Objective: Crystallization and X-ray Crystallization Analysis are in progress. However, N1G9 is still advancing in the analysis of the crystallization of both the Fab self and the complex, and the outline of the structure includes the large environmental knowledge of the binding site of the NP. 3B44 can be decomposed to determine the molecular configuration in crystallization. The detailed X-ray analysis of Fab structure is possible, and the study of affinity mature molecular mechanism is expected to make great progress in the future.