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好中球系細胞を用いた薬物送達システムの開発

使用中性粒细胞的药物递送系统的开发

基本信息

批准号：
18650137
负责人：
浅野茂隆
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

好中球系細胞は高い運動能と炎症部位への指向性から抗体などの既存の薬剤では到達が困難な疾患深部への迅速な治療手段の送達を可能にする。また極めて安全性の高い生分解性輸送媒体であり、治療手段を疾患部位に輸送した後速やかに自己融解する理想的な薬物送達システムである。この目的を実現する手段としてまず好中球系細胞を特異的に蛍光標識してその標的組織中での動態を視覚的に追跡可能とする事を試みた。造血幹細胞の代替としてG-CSFにより好中球系細胞に分化する事が知られる32Dcl3細胞を用いCMVプロモータの下流にGFPを導入したプラスミドベクターの導入を検討した。遺伝子導入後G418耐性を指標として安定的遺伝子導入森の選別を行い、800ug/mlのG418で選択する事により容易にGFP標識32Dcl3細胞を得る事ができた。次に好中球分化に応答した発現を実現するべく好中球エラスターゼ(Ela2)のプロモータを用いた発現系の構築を行った。文献に記載されたmEla2プロモータの近位エンハンサー領域としてTATA配列から-100bpまでの約80bpの領域を化学合成してプロモータを持たないGFP(pTurbo-PRL)の上流に挿入し、得られたpmEla2-GFPを32Dcl3細胞に安定的に導入後G-CSFを用いて好中球分化の誘導を行ったが現在までのところGFPの良好な発現は得られていない。Ela2が構成的に発現しているU937を用いた場合にも同様に発現が認められない事からさらに長い領域をプロモータとして用いるべくヒトゲノムDNAを鋳型に約2kbのEla2プロモータ断片をPCRクローニングした。塩基配列の確認が取れ次第pTurbo-PRLへの挿入に進む予定。

Good globular cells have high motor activity and specificity in inflammatory sites, and antibodies and existing agents can be used to reach difficult, deep, and rapidly treatable conditions. Highly safe and biodegradable delivery media, therapeutic means, delivery speed to affected sites, and ideal drug delivery system This goal is achieved by means of a unique optical signature in the target tissue and by means of a visual tracking technique. Hematopoietic stem cell replacement and G-CSF differentiation in 32 Dcl3 cells using CMV and GFP downstream introduction G418 tolerance index after gene introduction: stable gene introduction selection, 800ug/ml G418 selection, easy GFP marker 32 Dcl3 cell selection The second stage of the development of good spherical differentiation is the construction of the development system of good spherical differentiation. It is reported in the literature that mEla 2-GFP is chemically synthesized in the proximal region of TATA alignment from-100 bp to about 80bp, and that pTurbo-PRL is chemically synthesized in the upstream region of GFP(pTurbo-PRL). Ela2 gene fragment was found in U937, and the same gene fragment was found in U937. The identification of base alignment is determined by the order of entry of pTurbo-PRL.