分割GFPの再構成を利用した分子間相互作用可視化プローブの作成
使用分裂 GFP 的重构创建分子相互作用可视化探针
基本信息
- 批准号:18657058
- 负责人:
- 金额:$ 2.18万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 2007
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、分割したYFPの断片の相補的再会合による蛍光回復(BiFC法,Bimolecular Fluorescence Complementation法)を利用して、蛋白質分子間の相互作用や活性状態を生細胞で可視化するプローブを開発することを目的とした。アクチン脱重合因子であるコフィリンとアクチンとの結合状態、活性化状態(リン酸化状態)を可視化できるプローブを開発するため、分割YFPの断片をアクチンとコフィリンに融合し、結合依存的にYFP断片が相補的に再結合し蛍光を回復する組合わせをスクリーニングし、単色でS/N比の高い蛋白質間相互作用検出プローブの作成に成功した。しかし、このプローブの蛍光発色は不可逆的であり、生細胞で蛋白質間の結合・解離の時空間的変化を計測するには不適当であった。そこで、私たちは、本法を用いてLIMキナーゼ阻害剤をスクリーニングすることとした。LIMキナーゼ存在下では、コフィリンがリン酸化されアクチン結合能を失うため蛍光発色しないが、阻害剤があればLIMキナーゼの活性が失われ、蛍光発色することとなる。本法により、約1000種の低分子化合物から、2種の阻害剤を見出した。さらにそれらをリード化合物として新たに類似化合物を合成し、LIMキナーゼに特異性の高い阻害剤を探索し、数種の新たな阻害剤を同定した。これらの阻害剤の細胞運動、癌細胞浸潤に対する効果を測定し、有効な結果を得た。また、BiFCプローブは蛋白質間相互作用を高感度で検出することが可能であり、RasとRafなどシグナル伝達経路における分子間相互作用を高感度に検出することができ、RasとRafの結合阻害剤のスクリーニング系を開発した。
The purpose of this study is to utilize the BiFC method to visualize the interaction between protein molecules and the active state of living cells. The recombination factor, the binding state, the activation state (the acidification state), the visualization, the development, the fragmentation, the fusion, the binding-dependent recombination, the light recovery, the combination, the S/N ratio, the high protein-protein interaction, and the successful completion of the protein-protein interaction. The light emission of these proteins is irreversible, and the time and space of protein binding and dissociation are not appropriate. This method is used to prevent and treat diseases. In the presence of LIM, the binding energy is lost, and the inhibition agent is lost. About 1000 kinds of low molecular weight compounds and 2 kinds of inhibitors were found in this method. In addition, new compounds have been synthesized, and several novel inhibitors have been identified. The results of this study were as follows: The binding resistance of Ras Raf to protein-protein interactions is open to detection.
项目成果
期刊论文数量(19)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Phosphorylation of cofilin regulates actin-based retrograde flow in lamellipodia and lamellipodial length
丝切蛋白的磷酸化调节片状伪足中基于肌动蛋白的逆行流动和片状伪足长度
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Ohashi;K.;Fujiwara;S.;Kiuchi;T.,and Mizuno;K.
- 通讯作者:K.
Dronpa融合アクチンを用いた顕微鏡イメージングによるラメリポディア形成におけるコフィリンの機能解析
使用 Dronpa 融合肌动蛋白进行显微成像分析丝切蛋白在板状伪足形成中的功能
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:木内泰;大橋一正;栗田宗一;水野健作
- 通讯作者:水野健作
生体の科学(コフィリンを中心としたタンパク質間相互作用)
生物科学(以丝切蛋白为中心的蛋白质-蛋白质相互作用)
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:栗田宗一;水野健作(分担)
- 通讯作者:水野健作(分担)
Cofilin promotes stimulus-induced lamellipodium formation by generating an abundant supply of actin monomers.
- DOI:10.1083/jcb.200610005
- 发表时间:2007-05-07
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Kiuchi T;Ohashi K;Kurita S;Mizuno K
- 通讯作者:Mizuno K
The role of cofilin in actin filament assembly during lamellipodium formation
片状足形成过程中丝切蛋白在肌动蛋白丝组装中的作用
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Kiuchi;T.;Ohashi;K.;Kurita;S.,and Mizuno;K.
- 通讯作者:K.
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
水野 健作其他文献
力覚応答に関与するRhoGEF, SoloとPDZ-RhoGEFの相互作用の解析
RhoGEF参与力响应,Solo与PDZ-RhoGEF相互作用分析
- DOI:
- 发表时间:
2022 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
國富 葵;佐藤 博紀;東谷 なほ子;東谷 篤志;水野 健作;大橋 一正 - 通讯作者:
大橋 一正
細胞の力覚応答に関わるRho-GEF として同定したSolo の機能解析
Solo 的功能分析被确定为参与细胞力反应的 Rho-GEF
- DOI:
- 发表时间:
2013 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
藤原 佐知子;増子 寿弥;近藤 洋志;安彦 日和;佐藤 正明;大橋 一正;水野 健作 - 通讯作者:
水野 健作
上皮細胞のアクチン骨格制御と細胞間接着形成におけるRho-GEF, PLEKHG4Bの機能
Rho-GEF和PLEKHG4B在上皮细胞肌动蛋白骨架调节和细胞间粘附形成中的作用
- DOI:
- 发表时间:
2020 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
二宮 小牧;太田 海;山下 和成;水野 健作;大橋 一正 - 通讯作者:
大橋 一正
Furry によるチューブリン脱アセチル化酵素SIRT2の活性制御と分裂期紡錘体微小管のアセチル化に対する役割
Furry对微管蛋白脱乙酰酶SIRT2活性的调节及其在有丝分裂纺锤体微管乙酰化中的作用
- DOI:
- 发表时间:
2013 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
永井 友朗;池田 真教;千葉 秀平;菅野 新一郎;水野 健作 - 通讯作者:
水野 健作
力覚応答機構に関与するRhoGEF, Soloの相互作用タンパク質の同定
力响应机制中涉及的 RhoGEF 和 Solo 相互作用蛋白的鉴定
- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
國富 葵;佐藤 博紀;東谷 なほ子;東谷 篤志;水野 健作;大橋 一正 - 通讯作者:
大橋 一正
水野 健作的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
{{ truncateString('水野 健作', 18)}}的其他基金
Mechanisms of rigidity-dependent differentiation of mesenchymal stem cells
间充质干细胞的刚性依赖性分化机制
- 批准号:
21H02471 - 财政年份:2021
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
移動細胞先導端におけるアクチン動的システムの時空間的制御機構
迁移细胞前沿肌动蛋白动力系统的时空控制机制
- 批准号:
19037002 - 财政年份:2007
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
神経ガイダンスとスパイン形態変化におけるアクチン動態制御の機能解析
神经引导和脊柱形态变化过程中肌动蛋白动力学控制的功能分析
- 批准号:
18022002 - 财政年份:2006
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
がん細胞の運動能と浸潤・転移能亢進におけるコフィリン制御系の役割
丝切蛋白调节系统在癌细胞运动和增强侵袭/转移能力中的作用
- 批准号:
18013007 - 财政年份:2006
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
移動細胞先導端におけるアクチン動的システムの時空的制御機構
迁移细胞前沿肌动蛋白动力系统的时空控制机制
- 批准号:
17049002 - 财政年份:2005
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
コフィリンホスファターゼSlingshotの活性化のシグナル伝達機構と細胞運動における役割
丝切蛋白磷酸酶Slingshot激活的信号转导机制及其在细胞运动中的作用
- 批准号:
04F04455 - 财政年份:2004
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
細胞の形態と運動性を制御する細胞センシング機構
控制细胞形态和运动的细胞传感机制
- 批准号:
13GS0010 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Creative Scientific Research
細胞骨格の再構築制御におけるLIMキナーゼ経路の機能解明
LIM激酶通路在调节细胞骨架重塑中的功能阐明
- 批准号:
13480199 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
癌細胞の浸潤・転移におけるLIMキナーゼシグナル経路の機能
LIM激酶信号通路在癌细胞侵袭转移中的作用
- 批准号:
13216004 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
ウイリアムス症候群における空間認知障害の病因に関する基礎的研究
Williams综合征空间认知障碍病因基础研究
- 批准号:
12050206 - 财政年份:2000
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
相似海外基金
キナーゼのリン酸化・脱リン酸化を介したシグナル伝達制御のNMR動的構造生物学
通过激酶磷酸化/去磷酸化控制信号转导的 NMR 动态结构生物学
- 批准号:
23K27310 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
植物の鉄シグナル伝達を統御する分子機構の解明
阐明植物中控制铁信号传导的分子机制
- 批准号:
23K23498 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
ATR依存的DNA損傷応答の終結段階への遷移を制御するシグナル伝達機構と分子機構
控制 ATR 依赖性 DNA 损伤反应终止阶段转变的信号转导和分子机制
- 批准号:
24K09793 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
植物の匂い受容シグナル伝達機構の解明
阐明植物气味受体信号转导机制
- 批准号:
24H00565 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
電気化学活性バイオフィルムの形成を制御するシグナル伝達機構の解明
阐明控制电化学活性生物膜形成的信号转导机制
- 批准号:
24K01672 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
青色光に応答した気孔開口のシグナル伝達機構の解明
阐明蓝光响应气孔张开的信号转导机制
- 批准号:
24KJ1747 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
計算化学・イメージング法を用いた植物の匂い受容シグナル伝達機構の解明
使用计算化学和成像方法阐明植物气味受体信号转导机制
- 批准号:
24KJ0523 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
脂肪酸が腸管幹細胞の分化・自己複製を活性化するシグナル伝達を制御する機序の解明
阐明脂肪酸控制信号转导激活肠道干细胞分化和自我更新的机制
- 批准号:
24K20700 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
シグナル伝達経路を切り拓く新たなRASopathies発症機構の解明
阐明打开信号转导途径的新 RASopathies 发病机制
- 批准号:
23K27563 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
病態に直結するPKAシグナル伝達機構の解明と治療法開発
阐明与病理状况直接相关的 PKA 信号转导机制并开发治疗方法
- 批准号:
23K24346 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.18万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)