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分割GFPの再構成を利用した分子間相互作用可視化プローブの作成

分割GFPの再構成を利用した分子間相互作用可視化プローブの作成
使用分裂 GFP 的重构创建分子相互作用可视化探针
批准号：
18657058
负责人：
水野 健作
金额：
$2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2006 至 2007
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657058/
关键词：
アクチン細胞骨格シグナル伝達蛍光プローブFRETLIMキナーゼコフィリン蛋白質相互作用蛍光イメージング

项目摘要

项目成果

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本研究では、分割したYFPの断片の相補的再会合による蛍光回復(BiFC法,Bimolecular Fluorescence Complementation法)を利用して、蛋白質分子間の相互作用や活性状態を生細胞で可視化するプローブを開発することを目的とした。アクチン脱重合因子であるコフィリンとアクチンとの結合状態、活性化状態(リン酸化状態)を可視化できるプローブを開発するため、分割YFPの断片をアクチンとコフィリンに融合し、結合依存的にYFP断片が相補的に再結合し蛍光を回復する組合わせをスクリーニングし、単色でS/N比の高い蛋白質間相互作用検出プローブの作成に成功した。しかし、このプローブの蛍光発色は不可逆的であり、生細胞で蛋白質間の結合・解離の時空間的変化を計測するには不適当であった。そこで、私たちは、本法を用いてLIMキナーゼ阻害剤をスクリーニングすることとした。LIMキナーゼ存在下では、コフィリンがリン酸化されアクチン結合能を失うため蛍光発色しないが、阻害剤があればLIMキナーゼの活性が失われ、蛍光発色することとなる。本法により、約1000種の低分子化合物から、2種の阻害剤を見出した。さらにそれらをリード化合物として新たに類似化合物を合成し、LIMキナーゼに特異性の高い阻害剤を探索し、数種の新たな阻害剤を同定した。これらの阻害剤の細胞運動、癌細胞浸潤に対する効果を測定し、有効な結果を得た。また、BiFCプローブは蛋白質間相互作用を高感度で検出することが可能であり、RasとRafなどシグナル伝達経路における分子間相互作用を高感度に検出することができ、RasとRafの結合阻害剤のスクリーニング系を開発した。
期刊论文(19)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Phosphorylation of cofilin regulates actin-based retrograde flow in lamellipodia and lamellipodial length
丝切蛋白的磷酸化调节片状伪足中基于肌动蛋白的逆行流动和片状伪足长度
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [Ohashi, K., Fujiwara, S., Kiuchi, T.,and Mizuno, K.]
通讯作者： K.
Dronpa融合アクチンを用いた顕微鏡イメージングによるラメリポディア形成におけるコフィリンの機能解析
使用 Dronpa 融合肌动蛋白进行显微成像分析丝切蛋白在板状伪足形成中的功能
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [木内泰, 大橋一正, 栗田宗一, 水野健作]
通讯作者： 水野健作
生体の科学(コフィリンを中心としたタンパク質間相互作用)
生物科学（以丝切蛋白为中心的蛋白质-蛋白质相互作用）
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [栗田宗一, 水野健作(分担)]
通讯作者： 水野健作(分担)
Cofilin promotes stimulus-induced lamellipodium formation by generating an abundant supply of actin monomers.
DOI： 10.1083/jcb.200610005
发表时间： 2007-05-07
期刊： The Journal of cell biology
影响因子： --
作者： [Kiuchi T, Ohashi K, Kurita S, Mizuno K]
通讯作者： Mizuno K
共 17 条
    Mechanisms of rigidity-dependent differentiation of mesenchymal stem cells
    • 批准号：
      21H02471
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.15万
    • 财政年份：
      2021
    • 负责人：
      水野 健作
    • 依托单位：
      Tohoku University
    移動細胞先導端におけるアクチン動的システムの時空間的制御機構
    • 批准号：
      19037002
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.46万
    • 财政年份：
      2007
    • 负责人：
      水野 健作
    • 依托单位：
      Tohoku University
    神経ガイダンスとスパイン形態変化におけるアクチン動態制御の機能解析
    • 批准号：
      18022002
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $5.12万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      水野 健作
    • 依托单位：
      Tohoku University
    がん細胞の運動能と浸潤・転移能亢進におけるコフィリン制御系の役割
    • 批准号：
      18013007
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $8.58万
    • 财政年份：
      2006
    • 负责人：
      水野 健作
    • 依托单位：
      Tohoku University
    海外基金