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新たに発見されたミダゾラムのシナプス前作用の機構解明をめざす生理学的アプローチ

旨在阐明新发现的咪达唑仑突触前作用机制的生理学方法

基本信息

批准号：
18659459
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ミダゾラムの大脳新皮質微小抑制性シナプス後電流頻度とGABA神経終末α7ニコチン受容体に対する作用の解析[山本・福田・岡部]:生後2-3週齢のラットの脳スライス標本を作成し、大脳皮質体性感覚野V層の錐体細胞にパッチクランプを行い、GABA_A受容体を介する微小抑制性シナプス後電流(mIPSC)を記録して、ミダゾラムの作用をジアゼパム、フルニトラゼパム、ゾルピデムと比較した。すべての薬剤でmIPSC振幅が増大したが、頻度を増加させたのはミダゾラムのみであった。ベンゾジアゼピン受容体阻害剤のフルマゼニールはべての薬剤のmIPSC振幅増大作用を完全に遮断したが、ミダゾラムの頻度増加作用に効果なく、未知の作用経路が示唆された。この新奇作用はII/III, IV, VI層では起こらなかった。介在ニューロン細胞体へのニコチン直接投与反応に対しミダゾラムは効果なく、この作用はV層のGABA神経終末特異的であった。シナプスブートン標本を用いて神経終末に局在するα7ニコチン受容体を蛍光ラベルして膜移行を共焦点顕微鏡のリアルタイム3D法により解析した結果でも、mIPSC頻度を解析した結果でも、ミダゾラムの新奇作用はPKCインヒビターのcalphostin Cとbisindolylmaleimideによって抑制され、PKCアクチベーターのphorbol 12,13-dibutyrateによって促進したことから、PKCの関与が考えられた。2.ミダゾラムによるα7ニコチン受容体の膜移行を仲介する細胞内情報伝達分子の検討[福田・山本・熊田]:ミダゾラムにより活性化される神経終末のPKCアイソフォームを同定するため、フルマゼニールでポストシナプス作用をブロックした状態でPKCのリン酸化部位認識抗体を用いて脳スライスhomogenateのwestern blottingを行った。その結果、ミダゾラムもフルマゼニールもPKCによるリン酸化を促進した。

1. Analysis of the effect of microinhibitory post-synaptic current (mIPSC) on GABA receptor terminal α7 in the large neocortex of rats: The microinhibitory post-synaptic current (mIPSC) was recorded in pyramidal cells of layer V of the large neocortex at 2-3 weeks after birth, and compared with the effect of microinhibitory post-synaptic current (mIPSC) on GABA receptor α 7 in the large neocortex of rats at 2-3 weeks after birth. The amplitude and frequency of the mIPSC increase, and the frequency of the mIPSC increases. The effect of increasing the amplitude of the mIPSC due to the presence of the negative component is completely blocked, and the effect of increasing the frequency of the negative component is unknown. The novel effect of II/III, IV, VI layers. The effect of direct injection of GABA into the cell body is specific to the terminal of GABA in the V layer. The results of analysis by 3D method of confocal micromirrors show that mIPSC frequency analysis results in the novel effect of PKC on calphostin C bisindolylmaleimide. The inhibition and promotion of PKC in the novel effect of calphostin C bisindolylmaleimide. The inhibition and promotion of PKC in the novel effect of calphostin C bisindolylmaleimide results in the inhibition and promotion of PKC. PKC is related to the test. 2. Study of intracellular information transfer molecules mediated by membrane migration of α7-cfu receptor [Fukuda Yamamoto Kumada]: study of PKC activation in the brain terminal and identification of PKC acidification sites in the brain. The results of the study were as follows: