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新たに発見されたミダゾラムのシナプス前作用の機構解明をめざす生理学的アプローチ

旨在阐明新发现的咪达唑仑突触前作用机制的生理学方法

基本信息

批准号：
18659459
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ミダゾラムの大脳新皮質微小抑制性シナプス後電流頻度とGABA神経終末α7ニコチン受容体に対する作用の解析[山本・福田・岡部]:生後2-3週齢のラットの脳スライス標本を作成し、大脳皮質体性感覚野V層の錐体細胞にパッチクランプを行い、GABA_A受容体を介する微小抑制性シナプス後電流(mIPSC)を記録して、ミダゾラムの作用をジアゼパム、フルニトラゼパム、ゾルピデムと比較した。すべての薬剤でmIPSC振幅が増大したが、頻度を増加させたのはミダゾラムのみであった。ベンゾジアゼピン受容体阻害剤のフルマゼニールはべての薬剤のmIPSC振幅増大作用を完全に遮断したが、ミダゾラムの頻度増加作用に効果なく、未知の作用経路が示唆された。この新奇作用はII/III, IV, VI層では起こらなかった。介在ニューロン細胞体へのニコチン直接投与反応に対しミダゾラムは効果なく、この作用はV層のGABA神経終末特異的であった。シナプスブートン標本を用いて神経終末に局在するα7ニコチン受容体を蛍光ラベルして膜移行を共焦点顕微鏡のリアルタイム3D法により解析した結果でも、mIPSC頻度を解析した結果でも、ミダゾラムの新奇作用はPKCインヒビターのcalphostin Cとbisindolylmaleimideによって抑制され、PKCアクチベーターのphorbol 12,13-dibutyrateによって促進したことから、PKCの関与が考えられた。2.ミダゾラムによるα7ニコチン受容体の膜移行を仲介する細胞内情報伝達分子の検討[福田・山本・熊田]:ミダゾラムにより活性化される神経終末のPKCアイソフォームを同定するため、フルマゼニールでポストシナプス作用をブロックした状態でPKCのリン酸化部位認識抗体を用いて脳スライスhomogenateのwestern blottingを行った。その結果、ミダゾラムもフルマゼニールもPKCによるリン酸化を促進した。

1. ミダゾラムの big 脳 neocortex tiny inhibitory シナプス current frequency と GABA god 経 terminal after alpha 7 ニコチン by let body にす seaborne る role の parse [yamamoto, Mr Fukuda, okabe] : 2-3 weeks after birth 齢のラットの脳スライをス specimen made し, big 脳 skin plastid sexy 覚 wild V layer の pyramidal cells にパッチクランプをい, GAB A_A を interface by let body する tiny inhibitory シナプス after current records (mIPSC) をして, ミダゾラムの role をジアゼパム, フルニトラゼパム, ゾルピデムと compare した. The amplitude of the すべて drug でmIPSC is が increased, <s:1> たが, and the frequency is を increased, させた <s:1> でダゾラムダゾラムダゾラムみであったみであったみであった. ベンゾジアゼピン let body resistance against tonic のフルマゼニールはべての薬 tonic の mIPSC amplitude raised bigger role をに completely interrupt したが, ミダゾラムの frequency rights and role に unseen fruit なくが経 road, unknown の role of stopping された. The <s:1> novel function of the で II/III, IV, and VI layers plays the role of らならなったった. Medium in ニューロン cell body へのニコチン directly with the 応にし seaborne ミダゾラムは unseen fruit なく, この role は V layer の GABA god 経 terminal specific であった. をシナプスブートン specimen with いて god 経 terminal に bureau in する alpha 7 ニコチン by let body を蛍 light ラベルして membrane transitional を total focus 顕 micromirror のリアルタイム method of 3 d により parsing した results でも, mIPSC frequency を analytic した results でも, ミダゾラムの novel role は PKC インヒビターの calphostin C と bisindolylmaleimide によって inhibit され, PKC アクチベーターの phorbol 12, 13 - dibutyrate によって promote したことから, PKC の masato and が exam えられた. 2. ミダゾラムによる alpha 7 ニコチンの membrane by let body transitional を placement する intelligence 伝 of molecules in cells の検 for [the kumada, yasuo yamamoto,] : ミダゾラムにより activeness される god 経 terminal の PKC アイソフォームを with fixed するため, フルマゼニールでポストシナプス role をブロックした state で PKC のリ Antibodies for the recognition of the acidification site を are performed by をて脳スラスhomogenate を western blottingをった. Youdaoplaceholder0 <s:1> results, そダゾラムフフフダゾラムゼニゼニダゾラムたによるリ PKCによるリ <s:1> acidification を promotes たた.