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インビボ胎仔大脳皮質におけるクロライドトランスポーターKCC2の翻訳後修飾

体内胎儿大脑皮层氯离子转运蛋白 KCC2 的翻译后修饰

基本信息

批准号：
20021015
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 4.29万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1. KCC2蛋白機能抑制因子の検討-(2)(液性因子の検討):[福田]培養液中に17β-estradiol、progesteron、タウリンを加えて培養し、パッチクランプで異所性KCC2発現細胞のGABA逆転電位を測定し[Cl-]_i変化を検討した。タウリンのみ、GABA逆転電位を脱分極側にシフトさせたので、KCC2蛋白機能を抑制したと考えられた。2. 異所性KCC2蛋白の発達的機能変化とリン酸化/脱リン酸化の関与:[福田、古川]胎仔脳のスライスを作製して異所性KCC2を発現した細胞(EGFP発現)からパッチクランプ法により[Cl-]_iを測定した。脱リン酸化阻害剤vanadateは胎齢18日でも生後1週齢でも効果なく、リン酸化阻害剤staurosporineは異所性KCC2がまだ機能していない胎齢18日では効果なかったが、機能し始める生後1週では[Cl-]_iを低下させたので、KCC2蛋白の機能抑制にはリン酸化が関与している可能性が示唆された。インビボ胎仔皮質板細胞で一過性に豊富なタウリンが関与する可能性がある。3. 異所性KCC2蛋白の発達的機能変化とオリゴマー化の関係:[熊田、福田]強制発現させたKCC2のオリゴマー化の阻害が原因で機能発現しない可能性を検討するため、sulfhydry1還元剤を含まないdetergentを用いて異所性発現させたKCC2のWestern blottingを行った。異所性KCC2のバンドは抗Flag抗体(1:1000)を用いて同定し、タウリンの有無での異所性KCC2のモノマー/オリゴマー比を比較してオリゴマー化の差を解析したが、有意な差は認めなかった。以上から、細胞内タウリンの異所性KCC2蛋白機能抑制作用にはオリゴマー化の障害は関係していないと結論した。

1. Study on Inhibitors of KCC2 Protein Function-(2)(Study on Liquid Factors): 17β-estradiol, progeron and progerin were added to culture medium of [Futian], and GABA reverse potential of heterozygous KCC2-producing cells was measured. The protein function of KCC2 was inhibited by GABA reverse polarization. 2. Functional changes in expression of heterozygous KCC2 protein and its relation to acidification/deacidification:[Fukuda, Furukawa] fetal cell expression of heterozygous KCC2 protein (EGFP expression) and [Cl-]_i determination. At the 18th day after birth, the inhibitor vanadate was found to be effective, and at the 1st week after birth, the inhibitor staurosporine was found to be effective. The function of vanadate was found to be effective, and at the 18th day after birth, the function of vanadate was found to be decreased. The possibility of functional inhibition of KCC2 protein was shown. It is possible that fetal cortical plate cells are temporarily enriched. 3. The functional change of heterosexual KCC2 protein expression:[Kumata, Fukuda] stress expression of KCC2 protein expression of resistance to the cause of functional expression of KCC2 protein expression of resistance to sulfur 1 protein expression of KCC2 protein expression of heterosexual The difference between heterozygous KCC2 and anti-Flag antibody (1:1000) was analyzed and compared with the difference between heterozygous KCC2 and anti-Flag antibody (1:1000). The above results indicate that the inhibition of KCC2 protein function in cells is related to the inhibition of KCC2 protein function.