大脳新皮質形成過程におけるカハール・レチウス細胞と皮質板細胞のクロストーク

新皮质形成过程中 Cajal-Retius 细胞和皮质板细胞之间的串扰

• 批准号: 15016051
• 负责人: 福田 敦夫
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016051/
• 关键词: クロライドトランスポーター; 皮質版細胞; カハールレチウス細胞; 細胞移動; GABA; タウリン; 国際情報交換; ドイツ

1.マウス胎仔脳への電気穿孔法を用いたEGFP遺伝子導入による移動細胞の可視化(井上、山田、福田):分化直後の神経細胞に特異的にEGFPを発現させて移動過程を可視化する為、子宮内胎仔へのin vivo電気穿孔法により遺伝子導入を行った。すなわち、胎齢13日のマウス胎仔の側脳室にCAGプロモーターにEGFPあるいはDsRed2遺伝子を繋いだプラスミドを注入し、パルス電圧を加え脳室帯で分化直後の神経細胞に遺伝子導入した。これらの細胞がEGFP/DsRed2の蛍光を発しながら脳室帯から皮質板へ移動してinside-outの細胞配置により皮質を形成することを経時的に確認できた。これにより、細胞の発生時期を蛍光で識別することが可能になった。2.皮質板細胞でのCl^-ホメオスタシス調節遺伝子群発現バランスと細胞移動の解析(山田、岡部、福田):子宮内胎仔へのin vivo電気穿孔法により、分化直後の細胞(EGFP蛍光)にKCC2遺伝子を強制発現させ、[Cl^-]_iを低下させた細胞で細胞移動に変化があるかを調べた。まだ例数が少ないため、結論を得るために今後例数を増やす。グラミシジン穿孔パッチクランプ法でCl^-平衡電位を測定し、実際に[Cl^-]_iが低下していることを確認して、移動や[Cl^-]_iとの関係を明らかにする。3.辺緑帯におけるCajal-Retzius細胞間のクロストークの解析(福田、岡部、Luhmann):Cajal-Retzius細胞のグリシン受容体サブユニット(α1-3,β)とKCC2,NKCC1のmRNAの発現パターンを皮質板細胞と比較した。グリシン受容体はいずれもα2/βのヘテロであり、密度はCajal-Retzius細胞>皮質板細胞であった。また、両者ともNKCC1>KCC2の発現パターンを示したが、この傾向はCajal-Retzius細胞でより顕著であった。辺縁帯のtangential sliceを作成し、Cajal-Retzius細胞間のクロストークを膜電位イメージングで可視化したところ、グルタミン酸ではなくGABAとタウリンが興奮の伝播をになっており、NKCC1作用による[Cl^-]_i高値が関与していた。マイクロダイアライシス法ではタウリンが刺激応答的に増加することを発見した。

1. マ ウ ス tire tsai 脳 へ の 気 perforation method を with い た EGFP posthumous son 伝 import に よ る mobile cell の visualization (inoue, yamada, Mr Fukuda) : 経 cell differentiation after straight の god に specific に EGFP を 発 now さ せ て を mobile process visualization す る for, uterine tube seed へ の in vivo 気 perforation method に よ り heritage 伝 son import line を っ た. す な わ ち, tire 齢 13 の マ ウ ス tire lateral seed の 脳 chamber に the CAG プ ロ モ ー タ ー に EGFP あ る い は DsRed2 posthumous son 伝 を 繋 い だ プ ラ ス ミ ド を injection し, パ ル ス electric 圧 を plus え 脳 chamber 帯 で 経 cell differentiation after straight の god に heritage 伝 son import し た. こ れ ら の cells が EGFP/DsRed2 の 蛍 light を 発 し な が ら 脳 chamber 帯 か ら cortical plate へ mobile し て inside - out の cell configuration に よ り cortex を form す る こ と を 経 に confirmation when で き た. The を蛍 light で recognition する になった とが とが may になった during the stage of cell proliferation. 2. The cell cortex plate で の Cl ^ - ホ メ オ ス タ シ ス adjust heritage 伝 subgroup 発 now バ ラ ン ス と cellular mobile の parsing (yamada, okabe, fukuda) : uterine tube son へ の in Vivo 気 perforation method に よ り and divided straight after の cells (EGFP) 蛍 light に KCC2 posthumous son 伝 を forced 発 now さ せ, [Cl ^ -] _i を low さ せ た cells で mobile に variations change が あ る か を adjustable べ た. The number of まだ cases が is less than な ため ため, and the conclusion を is that the number of るために cases will increase やす in the future. グ ラ ミ シ ジ ン perforation パ ッ チ ク ラ ン プ method で Cl ^ - determination of equilibrium potential を し, be interstate に [Cl ^ -] _i が low し て い る こ と を confirm し て, mobile や [Cl ^ -] _i と の masato を and Ming ら か に す る. 3. 辺 green 帯 に お け る Cajal - Retzius intercellular の ク ロ ス ト ー ク の parsing (futian, okabe, Luhmann) : Cajal cells - Retzius の グ リ シ ン by let body サ ブ ユ ニ ッ ト (alpha 1-3, beta) と KCC2, NKCC1 の mRNA の 発 now パ タ ー ン を と compare cortical plate cells Youdaoplaceholder0 た. グ リ シ ン by let body は い ず れ も alpha/beta 2 の ヘ テ ロ で あ り, density は Cajal - > cortical plate Retzius cells で あ っ た. ま た, struck と も NKCC1 > KCC2 の 発 now パ タ ー ン を shown し た が, こ の tendency は Cajal cells - Retzius で よ り 顕 the で あ っ た. Youdaoplaceholder0 omamori tangential Slice を make し, Cajal - Retzius intercellular の ク ロ ス ト ー ク を membrane potential イ メ ー ジ ン グ で visualization し た と こ ろ, グ ル タ ミ ン acid で は な く GABA と タ ウ リ ン が excited の 伝 sowing を に な っ て お り, NKCC1 に よ る [Cl ^ -] _i high numerical が masato and し て い た. マ イ ク ロ ダ イ ア ラ イ シ ス method で は タ ウ リ ン が stimulus 応 a に raised and す る こ と を 発 see し た.

项目成果

Okabe, A. et al.: "Changes in chloride homeostasis-regulating gene expressions in the rat hippocampus following amygdala kindling."Brain Res.. 990. 221-226 (2003)

Okabe, A. 等人：“杏仁核点燃后大鼠海马中氯化物稳态调节基因表达的变化。”Brain Res.. 990. 221-226 (2003)

Farkas, I. et al.: "Complement C5a receptor-mediated signalling may be involved in neurodegeneration in Alzheimer's disease."J.Immunol.. 170. 5764-5771 (2003)

Farkas, I. 等人：“补体 C5a 受体介导的信号传导可能参与阿尔茨海默病的神经变性。”J.Immunol.. 170. 5764-5771 (2003)

Inoue, K.et al.: "Interaction of neuron-specific K^+-Cl^- cotransporter, KCC2,with brain-type creatine kinase."FEBS Lett.. in press. (2004)

Inoue, K.等人：“神经元特异性 K^ -Cl^- 协同转运蛋白 KCC2 与脑型肌酸激酶的相互作用。”FEBS Lett.. 正在出版。

Nakanishi, K.et al.: "Altered synaptic activities in cultures of neocortical neurons from prenatally X-irradiated rats."Neurosci.Lett.. 355. 715-724 (2004)

Nakanishi, K. 等人：“产前 X 射线照射的大鼠新皮质神经元培养物中突触活动的改变。”Neurosci.Lett.. 355. 715-724 (2004)

Takeuchi, K. et al.: "Effect of urinary trypsin inhibitor on potassium currents : fetus modulates membrane excitability by production of UTI."Acta Obstet.Gynecol.Scand.. 83. 6-11 (2004)

Takeuchi, K. 等人：“尿胰蛋白酶抑制剂对钾电流的影响：胎儿通过产生 UTI 调节膜兴奋性。”Acta Obstet.Gynecol.Scand.. 83. 6-11 (2004)