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宿主免疫細胞から攻撃されアポトーシスに陥った細胞を組織学的に同定する方法の開発

开发一种组织学鉴定被宿主免疫细胞攻击后发生凋亡的细胞的方法

基本信息

批准号：
18659482
负责人：
齋藤滋
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

胎児・胎盤は母体にとり異物であるが、免疫学的胎児許容機構が働き、胎児は拒絶されない。この機構が破錠すると母体免疫細胞は胎児を攻撃し流産が起こると推定されるが、これまでにヒトでは母体免疫細胞が直接胎児組織を攻撃した証拠を得ることができていなかった。そこで、本研究では細胞傷害性T細胞(CTL)や活性化NK細胞の細胞傷害に関与する顆粒内蛋白であるPerforin (P)、GranzymeB (GrB)、Granulysin (GL)の発現を流産検体で検討したところ、流産例の胎盤付着部(着床部)においてGL陽性のリンパ球が有意に増加していた。一方、P、GrB陽性細胞数には差を認めなかった。Flow cytometryにてGL陽性細胞はCD16^-CD56^<bright>NK細胞であることが判明した。脱落膜CD16^-CD56^<bright>NK細胞を分離後、IL-2で活性化させヒト絨毛外トロホブラスト(EVT)細胞株を共培養させたところ、12時間後にGLはEVT細胞の細胞質に発現し、24時間後にGLはEVT細胞の核に移行し、その後、EVT細胞はアポトーシスに陥った。この反応は細胞接触を必要とし、Pの発現も必要であることを確認した。GL発現ベクターにGFPを連合させたベクターをEVT細胞に発現させても同様の現象が認められた。GFP遺伝子をタンデムに2分子連合したベクターを用い単純拡散で核膜を移行できなくしても、GLは核に移行したことからGLは能動的に核内に移送され、その後アポトーシスを引き起こすことが判明した。次に免疫組織学的に流産胎盤の核にGLが発現していないかを検討したところ、流産例のEVTでは正常妊娠例に比し核内GL陽性細胞数が有意に多かった。また、核内GL陽性EVT細胞はTUNEL陽性でアポトーシスに陥っていた。今回の成績はヒト流産症例において宿主免疫担当細胞(NK細胞)がEVTを攻撃してアポトーシスを引き起こすことを初めて証明したものである。今後、妊娠高血圧腎症の胎盤や癌組織での応用が期待される。

Fetus, placenta, maternal foreign body, immunological fetal tolerance mechanism, fetal rejection The mechanism for maternal immune cells to attack fetal tissue is presumed to be the same as the mechanism for maternal immune cells to attack fetal tissue directly. In this study, the expression of Perforin (P), GranzymeB (GrB), Granulysin (GL) in cytotoxic T cells (CTL) and activated NK cells was studied in abortion models, and the expression of GL in placenta was increased intentionally. A square, P, GrB positive cell number difference Flow cytometry showed that GL positive cells were CD16^-CD56^<bright>NK cells. CD16^-CD56^<bright>NK cells were isolated, IL-2 was activated, and EVT cells were co-cultured at 6:00, 12:00, 24:00, and 12:00, respectively. The answer is yes. GL found GFP linked to EVT cells and found the same phenomenon. The GFP gene is linked to the 2 molecules in the nuclear membrane, and the GL gene is linked to the nuclear membrane in the nuclear membrane. The GL gene is linked to the nuclear membrane in the nuclear membrane. The GL gene is linked to the nuclear membrane in the nuclear membrane. The GL gene is linked to the nuclear membrane in the nuclear membrane. In addition, the number of GL positive cells in the nucleus of aborted placenta was significantly higher than that in normal pregnancy. In addition, the GL positive EVT cells in the nucleus were TUNEL positive. The results of this study are as follows: 1. The host immune system (NK cell) is attacked by the host immune system. In the future, pregnancy hypertension kidney disease placental cancer tissue use is expected.