シェーグレン症候群患者の自己抗体を用いた組織障害蛋白遺伝子のクローニング

使用干燥综合征患者的自身抗体克隆组织损伤蛋白基因

• 批准号: 18659610
• 负责人: 上松 隆司
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Matsumoto Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659610/
• 关键词: シェーグレン症候群; 自己抗体; 遺伝子; クローニング; 遺伝子クローニング

シェーグレン症候群におけるリンパ球の浸潤・増殖やγグロブリン産生機構のほか、唾液腺導管上皮の萎縮や破壊を誘導する自己抗体とその抗原(組織障害抗原蛋白)の由来は明らかにされていない。シェーグレン症候群の病態を克服するためには、治療の分子標的となる組織障害抗原蛋白とその抗原提示機序を明らかにすることが必須である。そこで、治療分子標的となりうる唾液腺組織障害抗原蛋白を明らかにすることを目的とし、1、シェーグレン患者の自己抗体の精製、2、自己抗体が認識している組織障害蛋白の唾液腺組織内での局在を検討した。まず、患者血清を用いてProtein-Aビーズでγ-グロブリンを結合させ、その後エルーションを行ってγ-グロブリンを精製した。これらの免疫グロブリンは、少量ずつ分注して使用するまで-25度に保存した。免疫組織染色を行うために、正常唾液腺(顎下腺、口唇腺等)とシェーグレン症候群患者の口唇腺を凍結またはパラフィン包埋し、厚さ6μmの連続切片をクライオスタットまたはミクロトームにて作製した。一次抗体としてシェーグレン患者抗血清からProteinAで精製したIgG抗体を用いた。二次抗体としてHRP標識anti-human IgG biotinylated antibodyを用いて免疫組織化学反応を行った。その結果、シェーグレン症候群患者の腺細胞の核内に陽性所見がみられた。さらに、唾液腺組織または唾液腺培養細胞から蛋白を抽出し、SDS-PAGEで電気泳動した後、イモビロントランスメンブレンに転写後、抗血清、HRP標識二次抗体を用いてECLで抗原を検出した。その結果、複数の蛋白バンドが検出され、SS-AとSS-Bに加え、他の抗核蛋白に対する抗体がシェーグレン患者の血清中に存在することが明らかとなった。今後は、UNIZAP II XRベクターを用いたcDNAライブラリーを作製し、クローニングを行う。

シ ェ ー グ レ ン syndrome に お け る リ ン パ の ball infiltrates, raised colonization や gamma グ ロ ブ リ ン produce institutions の ほ か, salivary gland epithelial の atrophy や 壊 を induced す る their antibody と そ の antigen (organization handicap of antigen protein) の origin は Ming ら か に さ れ て い な い. シ ェ ー グ レ ン syndrome の pathological を overcome す る た め に は, treatment の molecular mark と な る organization handicap of antigen protein と そ の antigen tip machine sequence を Ming ら か に す る こ と が must で あ る. そ こ で, treatment of molecular mark と な り う る salivary glands handicap of antigen protein を Ming ら か に す る こ と を purpose と し, 1, シ ェ ー グ レ ン patients の antibody の refined, 2, themselves antibody が know し て い る organization handicap of protein の salivary gland tissues で の bureau in を beg し 検 た. ま ず, patient serum を い て Protein - A ビ ー ズ で gamma グ ロ ブ リ ン を combining さ せ, そ の after エ ル ー シ ョ ン を line っ て gamma グ ロ ブ リ ン を refined し た. Youdaoplaceholder6 れら <s:1> immunize グロブリ <e:1> <e:1>, and a small amount of ず た should be subdivided into <s:1> て and stored at するまで-25 degrees に. Immunohistochemical staining line を う た め に, normal salivary gland (jaw gland, oral glands, etc.) under と シ ェ ー グ レ の ン syndrome patients oral glands を freeze ま た は パ ラ フ ィ ン embedding し and 6 microns thick さ の even 続 slice を ク ラ イ オ ス タ ッ ト ま た は ミ ク ロ ト ー ム に て cropping し た. A single antibody と beat てシェ グレ グレ <s:1> antiserum of the patient ら らProteinAで refined <s:1> たIgG antibody を with てシェ た. Secondary antibody と inoculated て HRP-labeled anti-human IgG biotinylated antibodyを immunohistochemical reaction 応を った. Youdaoplaceholder0 <s:1> results, に positive findings in the <s:1> nucleus of <s:1> glandular cells in patients with シェ グレ グレ <s:1> syndrome がみられた がみられた. さ ら に, salivary gland tissue ま た は salivary gland culture cell か ら を protein extraction し bathing, sds-page で electric 気 し た, イ モ ビ ロ ン ト ラ ン ス メ ン ブ レ ン に planning after writing, antiserum, HRP logo secondary antibody を with い て ECL で antigen を 検 out し た. そ の results, plural の protein バ ン ド が 検 out さ れ と SS and SS - A - B に え, he の resistance nucleoprotein に す seaborne る antibody が シ ェ ー グ レ の ン patients serum に exist す る こ と が Ming ら か と な っ た. Future は, UNIZAP II XR ベ ク タ ー を with い た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, ク ロ ー ニ ン グ う を line.

项目成果

Multidrug resistance-associated protein 7 expression is involved in cross-resistance to docetaxel in salivary gland adenocarcinoma cell lines.

• DOI: 10.3892/ijo.30.2.393
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: International journal of oncology
• 影响因子: 5.2
• 作者: Hiroko Naramoto;T. Uematsu;T. Uchihashi;R. Doto;T. Matsuura;Y. Usui;S. Uematsu;Xianqi Li;Masahiro Takahashi;M. Yamaoka;K. Furusawa

Refractory Factors in Head and Neck Cancer: ATP Binding Cassette Transporters Expressed in Head and Neck Cancer Cell Lines.

头颈癌的难治因素：头颈癌细胞系中表达的 ATP 结合盒转运蛋白。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Oral Sci Int 3(2)
• 作者: Takashi Uematsu;Hiroko Naramoto;Ryosuke Doto;Takayuki Uchihashi;Takashi Matsuura;Yohei Usui;Setsuko Uematsu;Xianqi Li;Masahiro Takahashi;Minoru Yamaoka and Kiyofumi Furusawa
• 通讯作者: Minoru Yamaoka and Kiyofumi Furusawa