細胞マイクロアレイ法を用いた自己抗体遺伝子の同定および自己免疫疾患の病態解析

细胞芯片法鉴定自身抗体基因及自身免疫性疾病病理分析

• 批准号: 14013024
• 负责人: 岸 裕幸
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013024/
• 关键词: 自己免疫疾患; リンパ球; 抗原; 抗原受容体; マイクロアレイ; チップ

重症筋無力症や甲状腺機能亢進症等に代表される自己免疫疾患はアセチルコリン受容体や甲状腺刺激ホルモン受容体などに対する自己抗体が産生されることにより引き起こされると考えられている。このような自己免疫疾患の発症には環境要因の他に遺伝的要因が考えられる。遺伝的要因として腫瘍組織適合抗原(MHC)と自己免疫疾患との関連が詳細に研究されている。その他の遺伝的要因のひとつに抗体遺伝子の多型性が考えられるが、抗体遺伝子の多型性と自己免疫疾患との関連については未だ研究が進んでいない。我々は、自己免疫疾患患者の自己抗体を遺伝子レベルでハイスループットな解析を行うために、自己抗原特異的Bリンパ球のクローンレベルでの同定ならびに自己抗体遺伝子のPCRによる増幅を、一つのチップ上で行うことができるような細胞マイクロアレイ法の樹立を目的として、以下の基礎的研究を行った。1.1個のヒトBリンパ球から抗体遺伝子を増幅・クローニングする方法を確立するために、ヒト免疫グロブリン(Ig)V領域の各ファミリーに共通なプライマーを設計し、1個のヒトBリンパ球から抗体遺伝子を増幅する条件を設定した。2.抗原特異的Bリンパ球の検出を改造型DNAマイクロアレイスキャナーを用いて行うために最適なマイクロウェルアレイチップの材質、形状等の最適化を行った。3.マイクロウェルチップへのリンパ球の分注方法を確立するために、自動スポッティング装置等の使用を含め、種々の方法を試みた。1、2に関してはほぼ条件設定が終わった。3に関しては自動スポッティング装置に関して検討を続けている。現在、プロトタイプのシステムの構築が完成に近づいており、実際の自己抗原を用いた疾患の解析を行おうとしている。

Myasthenia gravis, hyperthyroidism, etc., represent immune disorders such as thyroid gland stimulation, and thyroid gland stimulation. The main causes of immune disease are environmental factors and other factors. The relationship between MHC and autoimmune diseases was studied in detail. The main causes of other genetic mutations are the polymorphism of antibody genes, the polymorphism of antibody genes and the association between immune disorders. We aim to conduct the following basic research on the development of antibody-specific PCR for patients with immune disorders: 1.1. The method for determining the amplitude of antibody gene amplification is established, and the conditions for determining the amplitude of antibody gene amplification are set for each region of the immune system (Ig) V. 2. Antigen-specific B-sphere detection and modification of DNA design and optimization of materials and shapes 3. To establish the method of separation of the ball, to test the method of separation of the ball, etc. 1. 2. Set the conditions for closing. 3. The automatic detection device is connected to the detection device. Now, the construction of the system is complete, and the analysis of the disease in the application of the antigen is carried out.

项目成果

Kishi H, et al.: "Cooperative binding of c-Myb and Pax-5 activates the RAG-2 promoter in immature B cells"Blood. 99. 576-583 (2002)

Kishi H 等人：“c-Myb 和 Pax-5 的协同结合激活未成熟 B 细胞中的 RAG-2 启动子”血液。

Jin Z-X, et al.: "LEF-1 binds and activates the RAG-2 promoter together with c-Myb and Pax-5 in immature B cells"The Journal of Immunology. 169. 3783-3792 (2002)

Jin Z-X 等人：“在未成熟 B 细胞中，LEF-1 与 c-Myb 和 Pax-5 一起结合并激活 RAG-2 启动子”《免疫学杂志》。

Wei X-C, et al.: "Characterization of chromatin structure and enhancer elements for murine recombination activating gene-2"The Journal of Immunology. 169. 873-881 (2002)

Wei X-C，等：“小鼠重组激活基因2的染色质结构和增强子元件的表征”免疫学杂志。