霊長類の生殖幹細胞株(GS細胞)樹立にむけた幹細胞純化と異種移植系の開発

干细胞纯化和异种移植系统的开发用于建立灵长类生殖干细胞系（GS细胞）

• 批准号: 19659045
• 负责人: 大保 和之
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659045/
• 关键词: 解剖学; 再生医学; 細胞・組織; 発生分化; 生殖細胞

(1)異種移植系の確立昨年度、全身にGFPを発現するウサギ由来精巣を、NOGマウスをrecipientとして精細管移植したところ、GFP陽性のウサギ由来雄生殖細胞が、nudeマウスに比較して高率に精細管に認められたが、NOGマウスは精巣に浮腫を起こしやすいという問題があることがわかった。そこで移植拒絶の原因であるNK細胞を欠損、リンパ球が著減しているIL-2Rγ/RAG2欠損マウスを導入し、同様に精細管移植を行なったが、期待されるような高い移植成績は得られなかった。そこで、近年NOGマウスに匹敵するヒト組織が効率よく生着する新たな遺伝子改変マウスが樹立されており,今後異種精細管移植に使用する予定である。(2)精巣幹細胞株樹立に向けた、大型動物由来精原細胞の特性の解析マウス以外の動物よりCell Sorterを用いて精原細胞を粗精製し、マウスに準じた培養を行なったが、精原細胞は増殖しなかった。この原因としてサイトカインの種特異性や、雄生殖細胞分化プロセスの共通性の欠如など様々な原因が考えられた。そこで、近年ES細胞、ips細胞研究でゲノム修飾酵素を制御することにより樹立効率を上げることが行なわれていることから、精巣幹細胞株樹立に応用可能か精巣幹細胞のゲノム修飾状態を解析した。その結果、精原細胞はゲノム低メチル化とH3Me2K9修飾の欠損を特徴とした。また組織学的に各動物の精巣組織像を比較検討したところ、マーモセット、ウサギはマウスに類似し、ブタは極度に発達したライディッヒ細胞と多層の精細管群を特徴としマウスと大きく異なっていた。今後これらの結果を応用し、マウス類似の組織構造を持つ動物に焦点を絞り、ゲノム修飾酵素の制御を視野に、種を超えた精巣幹細胞培養法を検討する。

(1)Xenograft lines were established in the past year, whole body GFP expression was detected, and GFP positive expression was detected by male germ cells, nude cells, and sperm edema. The reasons for rejection of transplantation are: NK cell loss, IL-2R γ/RAG2 loss, introduction of fine tube transplantation, expectation of high transplantation results. In recent years, NOG has developed a new generation of tissue, which is expected to be used in the future. (2)Spermatogonia cell lines were established in large animals, and the characteristics of spermatogonia cells were analyzed in animals other than large animals. The reason for this is the species-specific differentiation of male germ cells and the lack of commonality of male germ cells. In recent years, ES cells and iPS cells have been studied for the control of modification enzymes, and the establishment of sperm stem cells has been improved. As a result, spermatogonia is characterized by low levels of H3Me2K9 modification and impairment. Histological characteristics of fine tubule of different animals In the future, the results of this study will be used to investigate similar tissue structures in animals, focus areas, control areas of modified enzymes, and sperm cell cultures.

项目成果

Analysis of the difference of chromatin architecture between stem cells and progenitor cells in the testis

睾丸干细胞和祖细胞染色质结构差异分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 大保和之;須田年生
• 通讯作者: 須田年生

The histone 3 lysine 4 methyltransferase, Mll2, is only required briefly in development and spermatogenesis.

• DOI: 10.1186/1756-8935-2-5
• 发表时间: 2009-04-06
• 期刊: Epigenetics & chromatin
• 影响因子: 3.9
• 作者: Glaser S;Lubitz S;Loveland KL;Ohbo K;Robb L;Schwenk F;Seibler J;Roellig D;Kranz A;Anastassiadis K;Stewart AF
• 通讯作者: Stewart AF

精巣幹細胞特異的発現分子により可視化された幹細胞のゲノム修飾動態

通过睾丸干细胞特异性表达分子可视化干细胞基因组修饰动态

• 发表时间: 2009
• 作者: Glaser S;Lubitz S;Lovel;KL;Ohbo K;et al.;大保和之
• 通讯作者: 大保和之

精粗細胞、精巣幹細胞から前駆細胞への一連の変遷におけるDNAのメチル化を中心とした核内の変化について

在精制细胞和睾丸干细胞向祖细胞的一系列转变过程中，以 DNA 甲基化为中心的核变化

• 发表时间: 2008
• 作者: 大保和之、白川峰征;他
• 通讯作者: 他