原子間力顕微鏡による蛋白質複合体の効率的観察法の開発

使用原子力显微镜开发蛋白质复合物的有效观察方法

• 批准号: 19659067
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659067/
• 关键词: 原子間力顕微鏡; 蛋白質複合体; 分子イメージング; 膜蛋白質; 細胞内情報伝達; バキュロウイルス; 組換え蛋白質; Sf9細胞; ミオシンV; カルモジュリン; シンタキシン; アイソフォーム

蛋白質複合体の作成については、バキュロウイルスの発現ベクター系を用いてこれを哺乳動物株細胞に導入する方法を併用した。導入した系には蛍光蛋白質GFP融合体を結合させ、特に膜蛋白質でもできる系を使用した。この系で、膜結合部位と膜外表、細胞内のアダプター分子結合部位を一貫して制御できた。すなわち、細胞外に接着分子結合部位を導入し、この発現分子をクラスターさせて融合蛋白質を可視化することに成功した。この系を原子間力顕微鏡に導入したが、発現量が十分な解像力を呈するほどには得られなかった。またタグとの相互作用が十分に強くなかったと思われるため、配列はまだ不完全であった。すなわち、部分的にそのような分子複合体と思われる像があったが、頻度が少ないために形態学的にそろった可視化には更なる生化学的手法の改良が必要と思われた。但し、膜蛋白質及びその細胞内情報伝達部位を一貫して可視化する方法を得た点、バキュロウイルス-昆虫細胞系での大量蛋白質産生と光学的可視化が可能な哺乳動物細胞系を連動させた発現系の構築の成功には大きな意義があったといえる。なおこの系の構築には、代表者の研究室の武内恒成准教授の協力を得た。分担者牛木の原子間力顕微鏡についても引き続き、バードウェア面、ソフトウェア面での画像解析の解像度上昇と操作簡便化に一定の改良が見られた。これによって、代表者らの研究結果との組合せで、萌芽研究としての目的で一定の結果は到達したと考えられるが、さらなる両者の共同で更なる改良が必要であることを確認した。

Protein complexes are produced in a variety of ways, such as in mammalian cell lines and in mammalian cells. The introduction of GFP fusion protein into the system and the use of GFP fusion protein in the system The membrane binding sites, membrane surface, and molecular binding sites in cells are all controlled. The fusion protein was successfully visualized by introducing the extracellular binding site and discovering the molecule. The atomic force of this system is introduced into the microscope, and the amount of light emitted is very small. The interaction is very strong, and the arrangement is incomplete. The molecular complex is thought to be more complex and more frequent than the morphological visualization. The biochemical technique is thought to be necessary. However, the method of consistent visualization of membrane proteins and intracellular information reached by insect cell lines and the optical visualization of large protein production made it possible to successfully construct mammalian cell lines. The cooperation of Professor Tsunei Takeuchi, a representative of the research office, was obtained. The resolution of the image resolution of the atomic force microscope is increased and the operation is simplified. The research results of the representative are combined, the purpose of the embryonic research is to arrive at a certain result, and the improvement of the representative is necessary.

项目成果

Establishment and characterization of monoclonal and polyclonalantibodies against human intestinal fatty acid-binding protein (I-FABP)using synthetip regional peptides and recombinant I-FABP.

使用合成末端区域肽和重组 I-FABP 建立抗人肠脂肪酸结合蛋白 (I-FABP) 的单克隆和多克隆抗体并进行表征。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Im加unoassay Immunochem 29
• 作者: Kajiura s;Yashiki T;Funaoka H;他;10名中8番目(代表者)
• 通讯作者: 10名中8番目(代表者)

Systematic identification of the proteins that operate the growth cone activity

系统鉴定控制生长锥活性的蛋白质

• 发表时间: 2007
• 作者: Nozumi M;Igarashi M
• 通讯作者: Igarashi M

Atomic force microscopy for imaging human metaphase chromosomes

• DOI: 10.1007/s10577-008-1241-7
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: CHROMOSOME RESEARCH
• 影响因子: 2.6
• 作者: Ushiki, Tatsuo;Hoshi, Osamu
• 通讯作者: Hoshi, Osamu

神経軸索の成長シュミレーシヨ・ンの開発

神经轴突生长模拟的发展

• 发表时间: 2008
• 作者: 小林太一朗;野住素広;寺島健史五十嵐道弘;赤澤宏平
• 通讯作者: 赤澤宏平

Handbook of Neurochemistry (3rd ed.)vol. 1 (Mikoshiba K ed.)

神经化学手册（第三版）卷。

• 发表时间: 2008
• 作者: Igarashi M;Ohko K
• 通讯作者: Ohko K