軸索成長円錐のプロテオーム解析

轴突生长锥的蛋白质组学分析

• 批准号: 13210055
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210055/
• 关键词: プロテオーム解析; 成長円錐; シンタキシン; 蛋白キナーゼ; カルシウム; 開口分泌

成長円錐におけるプロテオーム解析の第一段階として、蛋自質間のlinkage analysisをSNARE機構の中核分子syntaxinに関して行った。Ca/ATP依存性にsyntaxinに結合する蛋白質を脳から綱羅的に検索して、10種類程度の蛋白質を同定した。そのうち、カルモジュリン依存性蛋白キナーゼII(CaMKII)とsyntaxinの相互作用について、詳細に解析した。この結合は、Ca^<2+>濃度が10^<-6>M以上になったときだけ生じ、CaMKIIが自己リン酸化したものだけが結合することを証明した。また脱リン酸化や、Ca^<2+>濃度減少で結合も減少することから、この結合は可逆的である。CaMKIIはsyntaxinのlinker domainと呼ばれるシンタキシンの構造変化に重要な部位に結合する事がわかった。CaMKIIの触媒能はこの結合の有無に無関係であった。SyntaxinはCaMKII, SNAP-25, synaptotagmin Iと内因性の複合体を形成していることがわかった。またCaMKIIはMunc-18と競合して、open formに結合するものと結論された。クロマフィン細胞で開口放出によるカテコールアミンの遊離をamperometry法で測定したところ、結合部位であるlinker domainは開口放出頻度を半減させた。また上頸神経節細胞では後細胞側のシナプス後電位(EPSP)を測定したところ、linker domain注入細胞ではEPSPの低下が見られた。以上の結果は、linker domainが内因性のCaMKIIとsyntaxinの相互作用を阻害した結果、生じたものと解釈される。従って、CaMKIIとsyntaxinのCa^<2+>/ATP依存性結合は開口放出の生理的調節に大いに寄与していることが証明された。

Growth of the first stage of the growth of the cone, syntaxin of the core molecule syntaxin of the SNARE mechanism. Ca/ATP dependence is the syntaxin binding protein, the syntaxin is the same as the protein, and there are 10 types of proteins.そのうち, カルモジュリン-dependent protein キナーゼII (CaMKII) and syntaxin interaction について, detailed analysis した.この合は、Ca^<2+>concentration 10^<-6>M or above になったときだけRaw, CaMKII own リン acidification したものだけが combined with することをprove した. It is a reversible method of dehydrating and reducing the concentration of Ca^<2+>, reducing the binding rate, and reducing the binding rate. CaMKII's syntaxin linker domain is an important part of the structural modification of the linker domain, and the linker domain is an important part of the structure. The presence or absence of CaMKII's catalyst energy does not matter if it is combined. Syntaxin, CaMKII, SNAP-25, synaptotagmin I and endogenous complex are formed.またCaMKIIはMunc-18とCompetitionして、open formにcombinationするものと Conclusionされた.クロマフィン cell opening release によるカテコールアミンのfree amperometry method でmeasurement したところ、binding site であるlinker The frequency of domain openings has been reduced by half. The posterior potential (EPSP) of the posterior cervical ganglion cells was measured and the linker domain was injected into the cells and the EPSP was lowered. The result of the above is the result of the interaction between the linker domain and the syntaxin.従って、CaMKII and syntaxinのCa^<2+>/ATP dependence combined with the physiological regulation of opening and release に大いに Send and していることがproven された.

项目成果

Ohyama A et al.: "Regulation of eaocytosis through Ca^<2+>/ATP-dependent binding of autophprlylated CaMKII to syntaxin"Journal of Neuroscience. 22(印刷中). (2002)

Ohyama A等人：“通过自磷酸化CaMKII与突触蛋白的Ca 2+ /ATP依赖性结合来调节胞吞作用”，《神经科学杂志》22（出版中）。

五十嵐道弘: "ブレインサイエンスレビュー(伊藤正男編)"医学書院(印刷中). (2002)

五十岚道宏：“脑科学评论（伊藤正男编辑）” Igakushoin（出版中）。