カルモジュリン結合蛋白質によるシンタキシン機能のCa^<2+>依存性制御の解析

钙调蛋白结合蛋白对突触蛋白功能的Ca^2+依赖性调节的分析

• 批准号: 16044216
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044216/
• 关键词: ミオシンV; シンタキシン; SNARE機構; カルシウム; 開口放出; 原子間力顕微鏡; ノックインマウス; 小胞輸送; カルモジュリン; 神経細胞

シナプス小胞のリサイクリングは、種々のステップで異なる濃度のCa^<2+>を要求すると考えられている。報告者は、小胞のtranslocationに関わるsubcellular Ca^<2+>(0.1-1μM)を要求する、syntaxin-1Aの結合蛋白質としてmyosin-Vを見出し、その解析を行った。この分子が、syntaxin-1Aと結合する結合部位を明らかにするため、原子間力顕微鏡によって複合体形成を直接、可視化することに成功した。その結果、結合は明確にneck部分で生じていることを証明した。Neck部分に結合するCaMはsubmicromolar Ca^<2+>依存性に解離し、CaMが外れたIQ domainにsyntaxin-1Aが結合することが示された。この部位を認識する抗体を作成して、副腎髄質クロマフィン細胞へ導入して開口放出への影響を調べたところ、開口放出は阻害された。さらに、この過程は開口放出の早い相には影響せず、小胞が供給されて生ずる遅い相の放出を選択的に阻害することがわかった。以上の結果はこの結合により、小胞がmyosin-Vを介して、形質膜のsyntaxin-1Aに結合でき、SNARE複合体形成を進める前段階であるtetheringの分子的実体である可能性を示している。非神経細胞の形質膜型syntaxinアイソフォームであるsyntaxin-2,3,4についても同様の結合が起こるかどうかを解析し、結合親和性はやや低いものの同様の反応が起こることを証明した。報告者は、自己リン酸化型CaMKIIがsubmicromolar Ca^<2+>依存性にsyntaxin-1Aのlinker domainに結合する機構を報告した(J Neurosci 22:3342-51['02])が、これをさらに精査するためにsyntaxin-1A変異ノックインマウスを作成に成功した。

シ ナ プ ス vesicular の リ サ イ ク リ ン グ は, kind of 々 の ス テ ッ プ で different な る concentration の Ca ^ 2 + > < を requirements す る と exam え ら れ て い る. Reporter は, vesicular の translocation に masato わ る subcellular Ca ^ 2 + > < mu (0.1-1 M) を す る, syntaxin - 1 a の binding protein と し て myosin -v を see し, そ の parsing line を っ た. こ の molecular が, syntaxin - 1 a と combining す る combining site を Ming ら か に す る た め, interatomic force 顕 micromirror に よ っ て complex formation を direct and visual す る こ と に successful し た. Youdaoplaceholder0 the results, in combination with た, clarify the にneck part で student じて る る とを とを prove that た た. Neck part に combining す る CaM は submicromolar Ca ^ 2 + > < dependency し に dissociation, CaM が れ た IQ domain に syntaxin - 1 a が combining す る こ と が shown さ れ た. こ の parts を know す る antibody を made し て, adrenal gland, marrow qualitative ク ロ マ フ ィ ン cells へ import し て opening release へ の influence を adjustable べ た と こ ろ, opening out は resistance against さ れ た. さ ら に, こ の は opening release の い early phase に は influence せ ず, vesicular が supply さ れ て raw ず る 遅 い phase の release を sentaku に resistance against す る こ と が わ か っ た. の above results は こ の combining に よ り, vesicular が myosin -v を interface し て, plasma membrane の syntaxin - 1 a に combining で き and c2-style complex formation を into め る earlier order で あ る tethering の molecular be body で あ を る possibility in し て い る. Non god の 経 cells form plasma membrane syntaxin ア イ ソ フ ォ ー ム で あ る syntaxin - 2 and 4 に つ い て も with others の combining が up こ る か ど う か を analytical し, combined with affinity は や や low い も の の with others の anti 応 が up こ る こ と を prove し た. The reporter を, himself リ <s:1> acidified CaMKIIがsubmicromolar Ca^<2+> dependence にsyntaxin-1A <s:1> linker domainに combined with する institution を report た た(J Neurosci 22:33 42-51 [' 02) が, こ れ を さ ら に fine check す る た め に syntaxin - 1 a - different ノ ッ ク イ ン マ ウ ス を made に successful し た.

项目成果

The structure of C-banded human metaphase chromosomes as observed by atomic force microscopy.

• DOI: 10.1679/aohc.68.81
• 发表时间: 2005
• 期刊: Archives of histology and cytology
• 作者: D. Fukushi;T. Ushiki

Myosin-Va regulates exocytosis through the submicromolar Ca2+-dependent binding of syntaxin-1A.

• DOI: 10.1091/mbc.e05-03-0252
• 发表时间: 2005-10
• 期刊: Molecular biology of the cell
• 影响因子: 3.3
• 作者: Michitoshi Watanabe;Kazushige Nomura;A. Ohyama;R. Ishikawa;Y. Komiya;K. Hosaka;E. Yamauchi;H. Taniguchi;N. Sasakawa;K. Kumakura;T. Ushiki;O. Sato;M. Ikebe;M. Igarashi

CHRONIS : an animal chromosome image database.

CHRONIS：动物染色体图像数据库。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Chromosome Res. 13(6)
• 作者: Toyabe S;Akazawa K;Fukushi D;Fukui K;Ushiki T.
• 通讯作者: Ushiki T.

Role of Ser50 phosphorylation in SCG10 regulation of microtubule depolymerization

• DOI: 10.1002/jnr.20462
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Journal of Neuroscience Research
• 影响因子: 4.2
• 作者: T. Togano;M. Kurachi;Michitoshi Watanabe;G. Grenningloh;M. Igarashi

Cytoarchitecture of the normal rat olfactory epithelium : light and scanning electron microscopic studies.

正常大鼠嗅上皮的细胞结构：光和扫描电子显微镜研究。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Arch Histol Cytol. 67(2)
• 作者: Nomura T;Takahashi S;Ushiki T
• 通讯作者: Ushiki T