カルモジュリン結合蛋白質によるシンタキシン機能のCa^<2+>依存性制御の解析

钙调蛋白结合蛋白对突触蛋白功能的Ca^2+依赖性调节的分析

• 批准号: 16044216
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044216/
• 关键词: ミオシンV; シンタキシン; SNARE機構; カルシウム; 開口放出; 原子間力顕微鏡; ノックインマウス; 小胞輸送; カルモジュリン; 神経細胞

シナプス小胞のリサイクリングは、種々のステップで異なる濃度のCa^<2+>を要求すると考えられている。報告者は、小胞のtranslocationに関わるsubcellular Ca^<2+>(0.1-1μM)を要求する、syntaxin-1Aの結合蛋白質としてmyosin-Vを見出し、その解析を行った。この分子が、syntaxin-1Aと結合する結合部位を明らかにするため、原子間力顕微鏡によって複合体形成を直接、可視化することに成功した。その結果、結合は明確にneck部分で生じていることを証明した。Neck部分に結合するCaMはsubmicromolar Ca^<2+>依存性に解離し、CaMが外れたIQ domainにsyntaxin-1Aが結合することが示された。この部位を認識する抗体を作成して、副腎髄質クロマフィン細胞へ導入して開口放出への影響を調べたところ、開口放出は阻害された。さらに、この過程は開口放出の早い相には影響せず、小胞が供給されて生ずる遅い相の放出を選択的に阻害することがわかった。以上の結果はこの結合により、小胞がmyosin-Vを介して、形質膜のsyntaxin-1Aに結合でき、SNARE複合体形成を進める前段階であるtetheringの分子的実体である可能性を示している。非神経細胞の形質膜型syntaxinアイソフォームであるsyntaxin-2,3,4についても同様の結合が起こるかどうかを解析し、結合親和性はやや低いものの同様の反応が起こることを証明した。報告者は、自己リン酸化型CaMKIIがsubmicromolar Ca^<2+>依存性にsyntaxin-1Aのlinker domainに結合する機構を報告した(J Neurosci 22:3342-51['02])が、これをさらに精査するためにsyntaxin-1A変異ノックインマウスを作成に成功した。

据认为，突触囊泡的回收需要在各个步骤下进行不同浓度的Ca^<2+>。记者发现肌球蛋白V是语法素1a的结合蛋白，它需要参与囊泡易位的亚细胞Ca^<2+>（0.1-1μm），并进行了分析。为了揭示该分子与语法素1a结合的结合位点，我们成功地通过原子力显微镜直接可视化了复合物的形成。结果，证明结合显然发生在颈部部分。凸轮与颈部部分结合，分离为近极Ca^<2+>依赖性，表明Syntaxin-1a与去除CAM的IQ结构域结合。识别该位点的抗体是生产并引入肾上腺髓质脂蛋白细胞的，以研究开放释放的作用，并抑制开口的释放。此外，已经发现该过程对快速开放阶段没有影响，并有选择地抑制了囊泡供应产生的慢相的释放。以上结果表明，这种结合允许囊泡通过肌球蛋白V与质膜中的语法1a结合，并且可以是链球的分子实体，这是进行SNARE复合物形成的前步骤过程。我们分析了语法-2、3、4是否发生类似的结合，这些结合是非神经元细胞的质膜型语法素同工型，并证明尽管结合亲和力略低，但同样的反应也会发生。记者报道了自体磷酸化的CaMKII与依赖性的ca^<2+>依赖项中的Syntaxin-1a接头结构域结合的机制（J Neurosci 22：3342-51 ['02]），但为了进一步仔细检查，他们成功地创建了Syntaxin-1a-1a-1a突变型突变。

项目成果

The structure of C-banded human metaphase chromosomes as observed by atomic force microscopy.

• DOI: 10.1679/aohc.68.81
• 发表时间: 2005
• 期刊: Archives of histology and cytology
• 作者: D. Fukushi;T. Ushiki

Role of Ser50 phosphorylation in SCG10 regulation of microtubule depolymerization

• DOI: 10.1002/jnr.20462
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Journal of Neuroscience Research
• 影响因子: 4.2
• 作者: T. Togano;M. Kurachi;Michitoshi Watanabe;G. Grenningloh;M. Igarashi

CHRONIS : an animal chromosome image database.

CHRONIS：动物染色体图像数据库。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Chromosome Res. 13(6)
• 作者: Toyabe S;Akazawa K;Fukushi D;Fukui K;Ushiki T.
• 通讯作者: Ushiki T.

Glia-derived inhibitors of axonal regrowth : Implication for the molecular strategy of axonal regeneration.

神经胶质细胞衍生的轴突再生抑制剂：对轴突再生分子策略的影响。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Med Biol 53(2)
• 作者: Igarashi M;Sato M
• 通讯作者: Sato M

Cytoarchitecture of the normal rat olfactory epithelium : light and scanning electron microscopic studies.

正常大鼠嗅上皮的细胞结构：光和扫描电子显微镜研究。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Arch Histol Cytol. 67(2)
• 作者: Nomura T;Takahashi S;Ushiki T
• 通讯作者: Ushiki T