細胞周期を制御するCDK1のケミカル条件変異ヒト細胞株の樹立と表現型解析

控制细胞周期的 CDK1 化学突变人类细胞系的建立和表型分析

• 批准号: 19659069
• 负责人: 武田 俊一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659069/
• 关键词: CDK; ケミカルジェネティックス; DT40

Cyclin dependent kinase(CDK)は、細胞分裂周期をコントロールする司令塔である。CDKは、分裂周期の各フェーズ毎に違う機能を持つので、単純な遺伝子破壊では、CDKが持つすべての機能を調べることができない。各フェーズ毎の機能を調べる為には、CDK阻害剤が使われてきた。ところが、ケミカルの阻害剤は、必ずOFF target効果があり、実験結果の解釈は必ずしも単純にはいかない。これらの、遺伝学的解析と阻害剤を使った解析との、それぞれの弱点を補う新しい研究手法が、ケミカルジェネティックスである。我々は、遺伝子破壊が容易なニワトリDT40細胞株にケミカルジェネティックスを応用してCDK1の条件破壊株を作った。得られた細胞は、阻害剤添加後、10分以内にCDK1が抑制され、細胞がG2期で-時停止する。一方、阻害剤を除去すると、10分以内にCDK1が再活性化され、G2からM期に細胞周期が進行することがわかった。よってCDK1は、G2からM期への移行に必須である。同様のCDK1の条件破壊をCDK2欠損細胞で行なった。すると、CDK2欠損細胞は全く正常に増殖できるにもかかわらず、CDK1とCDK2とが両方不活性化されると、細胞はDNA複製を開始できないことがわかった。ゆえに、複製開始については、CDK1とCDK2とが完全に重複した機能を持ち、いずれか一方が存在すれば、DNA複製は正常に完了することが明らかになった。同様に、中心体の複製も、CDK1もしくはCDK2の、いずれか一方が存在すれば、正常に起こることも解明できた。

Cyclin dependent kinase(CDK) トロ, cell division cycle をコ トロ トロ する する command tower である. CDK は, division cycle の each フ ェ ー ズ their に violations う function を hold つ の で, 単 pure な heritage 伝 son broken 壊 で は, CDK が hold つ す べ て の function を adjustable べ る こ と が で き な い. Each フェ フェ ズ ズ can を adjust べる to に, and the CDK inhibitor が makes われて た た. と こ ろ が, ケ ミ カ ル の resistance tonic は, shall ず OFF target unseen fruit が あ り, be 験 results の solution 釈 は will ず し も 単 pure に は い か な い. こ れ ら の, but 伝 learn analytical と resistance against tonic を make っ た parsing と の, そ れ ぞ れ の weakness を fill う new し い research technique が, ケ ミ カ ル ジ ェ ネ テ ィ ッ ク ス で あ る. I 々 は, but 伝 broken 壊 が easy な ニ ワ ト リ DT40 cell lines に ケ ミ カ ル ジ ェ ネ テ ィ ッ ク ス を 応 with し て CDK1 の condition broken 壊 strains を っ た. After the addition of the inhibitor, にCDK1が is inhibited され within 10 minutes, and する is stopped at で- in the がG2 phase of the cells. One party, the resistance against tonic を remove す る と, 10 points に CDK1 が again activeness さ れ, G2 か ら M phase に cell cycle が す る こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder0 CDK1, G2 らM phase へ <s:1> transfer に must である. Similarly, <s:1> CDK1 <s:1> conditions break 壊をCDK2 underdamaged cells で perform なった. す る と は く all normal, CDK2 owe damage cells に raised colonization で き る に も か か わ ら ず, CDK1 と CDK2 と が struck party not activeness さ れ る と, cell は DNA replication を began で き な い こ と が わ か っ た. ゆ え に, duplicate に つ い て は, CDK1 と CDK2 と が completely に repeat し た function を hold ち, い ず れ か side が exist す れ ば, DNA replication は normal finished に す る こ と が Ming ら か に な っ た. With others in に, centrosome の copy も, CDK1 も し く は CDK2 の, い ず れ か side が exist す れ ば, normal に こ る こ と も interpret で き た.

项目成果

An essential role for Cdkl in S phase control, revealed by chemical genetics in vertebrate cells.

脊椎动物细胞的化学遗传学揭示了 Cdkl 在 S 期控制中的重要作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Cell Biol. 178
• 作者: Hochegger H;Dejsuphong D;Sonoda E;Saberi A;Rajendra E;Kirk J;Hunt T;Takeda S
• 通讯作者: Takeda S