高頻度に標的組み換えを起こすニワトリBリンパ細胞株を使った標的組み換え機構の解析

利用经常进行靶向重组的鸡 B 淋巴细胞系分析靶向重组机制

• 批准号: 12024212
• 负责人: 武田 俊一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12024212/
• 关键词: DT40; 発がん; DNA修復; 癌治療; チェックポイント; 放射線; 相同DNA組み換え

これまで細胞生物学の分野のFunctional genomicsは、酵母でしかできなかった。DT40細胞は、以下に我々の業績を述べながら説明するように、酵母に匹敵するFunctional genomicsを動物細胞でも行うことが可能になった先駆けと位置ずけることのできる実験系である。我々は、DNA修復/チェックポイントシステムの変異細胞をDT40から作成し、その表現型を解析してきた。我々の研究成果を以下に列挙する。1)相同DNA組み換えが放射線照射によってゲノムに誘導された損傷を修復するのに重要な働きをすることを解明した(論文リスト:5)。2)相同DNA組み換えが減数分裂の時だけでなく体細胞分裂の各サイクル毎にDNA修復のために必須の働きをすることを証明した(論文リスト:3,4,6)。3)我々はDNA損傷によって活性化されるチェックポイント機構が、従来から解明されてきたように細胞分裂周期を一時停止するだけでなく、相同DNA組み換えによるDNA修復をアップレギュレートすることを見い出した(論文リスト:2)。4)Rad51は、大腸菌RecA分子と構造的な相同性を持つ相同DNA組み換えにおいて中心的役割をもつ分子である。そして、動物細胞は、Rad51と構造的に似た分子を5種類(Rad51B/Rad51C/Rad51D/XRCC2/XRCC3)さらに持っている。我々は、これらの分子の各シングルミュータントを作成、解析することによって、これら5種類の分子はコンプレックスを作ってRad51を補助することを証明した(論文リス1)。これらの研究成果は、単に新規にクローニングされた遺伝子を世界に先駆けてノックアウトしただけでなく、その表現型を注意深く、既存/新規の方法をトライしながら解析した結果、世界的に認められたものである。

Functional genomics of cell biology, yeast, etc. DT40 cells are described in the following terms of their performance: Functional genomics of animal cells, possible pre-emptive location, and system. DNA repair and analysis of the phenotype of different cells The results of our research are listed below. 1)The same DNA sequence is responsible for the repair of radiation induced damage. 2)It is proved that the same DNA sets are changed during meiosis, and the necessary conditions for DNA repair in somatic cell division are changed during meiosis (Paper: 3, 4, 6). 3)The DNA damage is caused by the activation of the DNA repair system, and the cell division cycle is temporarily stopped. The DNA repair system is also caused by the change of the same DNA group. 4)Rad51, Escherichia coli RecA molecular structure identity, maintain the same DNA group, change the center of the service, cut the molecule. 5 kinds of molecules (Rad 51B/Rad 51C/Rad 51D/XRCC2/XRCC3) were found in animal cells. The molecular structure of the five species is described in detail in this paper. The results of this research are different from those of the previous ones, and the new ones are different from those of the previous ones.

项目成果

M.Takata,M.S.Sasaki,S.Tachiiri,T.Fukushima,E.Sonoda,D.Schild,L.H.Thompson,and S.Takeda: "Chromosome instability and defective recombinational repair in knockout mutants of the five Rad51 paralogs."【論文リスト:1】 Mol.Cell.Biol. (2001)

M. Takata、M. S. Sasaki、S. Tachiiri、T. Fukushima、E. Sonoda、D. Schild、L. H. Thompson 和 S. Takeda：“五个 Rad51 旁系同源基因敲除突变体中的染色体不稳定性和缺陷重组修复 [论文”。列表：1] 分子细胞生物学 (2001)

Y.Yamaguchi-Iwai,E.Sonoda,M.S.Sasaki,C.Morrison,T.Haraguchi,Y.Hiraoka,Y.M.Yamashita,T.Yagi,M.Takata,C.Price,N.Kakazu,and S.Takeda: "Mrel 1 is essential for the maintenance of chromosomal DNA in vertebrate cells."【論文リスト:3】 EMBO J. 18. 6619-6629 (1999)

Y. Yamaguchi-Iwai、E. Sonoda、M. S. Sasaki、C. Morrison、T. Haraguchi、Y. Hiraoka、Y. M. Yamashita、T. Yagi、M. Takata、C. Price、N. Kakazu 和 S. Takeda：“ Mrel 1 对于脊椎动物细胞中染色体 DNA 的维持至关重要。” [论文列表：3] EMBO J. 18. 6619-6629 (1999)

E.Snnoda,M.S.Sasaki,J.-M.Buerstedde,O.Bezzubova,A.Shinohara,H.Ogawa,M.Takata M.,Y.Yamaguchi-twai and S.Takeda: "Rad51 deficient vertebrate cells accumulate chromosomal breaks prior to cell death."【論文リスト:6】 EMBO J. 17. 598-608 (1998)

E.Snoda、M.S.Sasaki、J.-M.Buerstedde、O.Bezzubova、A.Shinohara、H.Okawa、M.Takata M.、Y.Yamaguchi-twai 和 S.daTake：“Rad51 缺陷的脊椎动物细胞累积染色体断裂“细胞死亡之前。” [论文列表：6] EMBO J. 17. 598-608 (1998)

C.Morrison,E.Sonoda,N.Takao,A.Shinohara,K.Yamamoto and S.Takeda: "The controlling role of ATM in homologous recombinational repair of DNA damage."【論文リスト:2】 EMBO J. 19. 463-471 (2000)

C.Morrison、E.Sonoda、N.Takao、A.Shinohara、K.Yamamoto 和 S.Takeda：“ATM 在 DNA 损伤同源重组修复中的控制作用。”[论文列表：2] EMBO J. 19。 463-471 (2000)

M.Takata,M.S.Sasaki,E.Sonoda,C.Morrison,Y.Yamaguchi-Iwai,A.Shinohara and S.Takeda: "Sister chromatid exchanges are mediated by homologous recombination in vertebrate cells."【論文リスト:4】 EMBO J. 17. 5166-5169 (1998)

M.Takata、M.S.Sasaki、E.Sonoda、C.Morrison、Y.Yamaguchi-Iwai、A.Shinohara 和 S.Takeda：“姐妹染色单体交换是由脊椎动物细胞中的同源重组介导的。”[论文列表：4] EMBO J. 17. 5166-5169 (1998)