高頻度に標的組換えを起こすニワトリ細胞を使った細胞周期解析

使用经常进行靶向重组的鸡细胞进行细胞周期分析

• 批准号: 01F00518
• 负责人: 武田 俊一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00518/
• 关键词: DNA修復; DNA組換え; 細胞分裂; 発がん; 老化; 細胞周期; 相同DNA組み換え; 放射線; Rad51; Poly polymerase

現在、2つのテーマを研究している。第一のテーマは(i)Poly[ADP ribose]polymerase-I (PAR P-I、染色体断裂発生後1分以内に活性化されるタンパク修飾酵素)の欠損DT40細胞の作製であり、第二のテーマは(ii)細胞周期フェーズ毎の、Rad51(大腸菌RecAホモログで、相同DNA組み換えで最も重要な分子)の活性制御である。(i)par p-I,par p-I/ku70 2重欠損,par p-I/atm 2重欠損を既に作製した。par p-Iとatmのそれぞれの単独欠損株はほぼ正常に増殖できるが、2重欠損はきわめて病的であり、Par p-IとAtmとのあいだで、これまで知られていなかった機能的相互関係があることが示唆されている。その相互関係の内容を解明するべく、いま詳細な表現型解析を行っている。(ii)第二のテーマでは、CDK inhibitor(ルスコビチン)によりRad51の活性化が抑制されることを証明した。ただし薬剤を使った実験結果のみでは論文に十分でないので、以下のプロジェクトを計画した。ヒト(ニワトリ)では9種類のCDK様分子が存在する。このうちCDK1/Cdc2、CDK2が分裂周期で主要な役割を持つらしい。また、相同DNA組換えによる修復機構は、DNA損傷発生後、酵母では常に活性化されうるがヒトではS/G2フェーズでしか活性化されない。CDKは細胞周期の各フェーズ毎に多様な機能を持つので、同調培養した細胞で一瞬にしてCDK機能を可逆的にOFFにできないと(条件変異と呼ぶ)、詳細な機能解析はできない。ニワトリBリンパ細胞株、DT40からCDK条件変異株をDT40から作製するプロジェクトを現在遂行中である。

Now, 2 テ テ テ を を を study て る る. The first group テ テ テ テ テ (i)Poly[ADP ribose]polymerase-I (PAR P - I, chromosome break 発 born within 1 minute に activeness さ れ る タ ン パ ク modification enzyme) の owe loss DT40 cells の cropping で あ り, second の テ ー マ は (ii) the cell cycle フ ェ ー ズ their の, Rad51 (coliform rec a ホ モ ロ グ で group, the exact same DNA み in え で molecular) is the most important な も の active suppression で あ る. (i) heavy underloss of par p-I,par p-I/ku70 2, heavy underloss of par p-I/atm 2 を and に are used to make た. Par p - I と ATM の そ れ ぞ れ の 単 alone owe damage strain は ほ ぼ normal に raised colonization で き る が, 2 heavy owe damage は き わ め て disease で あ り, par p - I と ATM と の あ い だ で, こ れ ま で know ら れ て い な か っ mutual masato た functionary department が あ る こ と が in stopping さ れ て い る. Youdaoplaceholder0 そ interrelationship <s:1> content を explanation するべく, ま ま detailed な phenotypic analysis を line って る る る. (ii) the second の テ ー マ で は, CDK inhibitor (ル ス コ ビ チ ン) に よ り Rad51 の activeness が inhibit さ れ る こ と を prove し た. た だ し 薬 tonic を make っ た be 験 results の み で は paper に very で な い の で, the following の プ ロ ジ ェ ク ト を project し た. Youdaoplaceholder0 (ニワトリ)で が 9 types of <s:1> cdk-like molecules が exist する. The が うちCDK1/Cdc2, CDK2が fission cycle で mainly な plays を and を supports ら ら ら が を. ま た group, the exact same DNA in え に よ る DNA damage repair は, 発 after birth, yeast で は often に activeness さ れ う る が ヒ ト で は S/G2 フ ェ ー ズ で し か activeness さ れ な い. CDK は cell cycle の each フ ェ ー ズ their に many others な function を hold つ の で, homology cultivation し た cells で moment に し て CDK function を reversible に OFF に で き な い と - different と shout ぶ (conditions), detailed な functional analytic は で き な い. ニ ワ ト リ B リ ン パ cell lines, DT40 か ら CDK conditions - different strains を DT40 か ら cropping す る プ ロ ジ ェ ク ト を now carries out in で あ る.

项目成果

Yamazoe, M., Sonoda, E., Hochegger, H., Takeda, S.: "Reverse genetic studies of the DNA damage response in the chicken B lymphocyte line DT40."DNA Repair. (in press).

Yamazoe, M.、Sonoda, E.、Hochegger, H.、Takeda, S.：“鸡 B 淋巴细胞系 DT40 中 DNA 损伤反应的反向遗传学研究。”DNA 修复。

Yamashita, Y.M., Okada, T., Matsusaka, T, Sonoda1, E., Cho, Z., Araki, K., Tateishi, S., Yamaizumi, M., Takeda, S.: "RAD18 and RAD54 cooperatively contribute to maintenance of genomic stability in vertebrate cells."EMBO J. 21. 5558-5566 (2002)

Yamashita, Y.M.、Okada, T.、Matsusaka, T、Sonoda1, E.、Cho, Z.、Araki, K.、Tateishi, S.、Yamaizumi, M.、Takeda, S.：“RAD18 和 RAD54 共同致力于

Okada T., Sonoda E., Yamashita, Y.M., Koyoshi, S., Tateishi, S., Yamaizumi, M., Takata, M., Ogawa, O., Takeda S.: "Involvement of Vertebrate Pol k in Rad18-independent Postreplication Repair of UV damage"J. Biol. Chem. 277. 48690-48695 (2002)

冈田 T.、园田 E.、山下 Y.M.、小吉 S.、立石 S.、山泉 M.、高田 M.、小川 O.、武田 S.：“脊椎动物 Pol k 在 Rad18- 中的参与

Hochegger, H., Sonoda, E., Takeda, S.: "Post Replication Repair in DT40 cells : Translesion Polymerases versus Recombinases. (Review)"Bio Essay. 26. 151-158 (2003)

Hochegger, H.、Sonoda, E.、Takeda, S.：“DT40 细胞的复制后修复：跨损伤聚合酶与重组酶。（评论）”生物论文。

J.Henry-Mowatt1, D.Jackson, J.-Y.Masson, P.A.Johnson, P.M.Clements, F.E.Benson, L.H.Thompson, S.Takeda, S.C.West: "XRCC3 and RAD51 Modulate Replication Fork Progression on Damaged Vertebrate Chromosomes"Mol. Cell. (in press). (2003)

J.Henry-Mowatt1、D.Jackson、J.-Y.Masson、P.A.Johnson、P.M.Clements、F.E.Benson、L.H.Thompson、S.Takeda、S.C.West：“XRCC3 和 RAD51 调节受损脊椎动物染色体上的复制叉进展”Mol