ターゲテドプロテオミクスによる血清マーカー複合体のマルチプレックス解析技術開発

利用靶向蛋白质组学开发血清标记物复合物多重分析技术

• 批准号: 19659140
• 负责人: 浜窪 隆雄
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659140/
• 关键词: PTX3; 疾患マーカー; プロテオミクス; 炎症; 自然免疫; LC; MS; タンパク質複合体; 磁気ビーズ; ペントラキシン; モノクローナル抗体; 磁性ビーズ; 質量分析; 血液マーカー; 心血管疾患

PTX3はペントラキシンファミリーに属するタンパク質で、炎症時に白血球や血管内皮細胞から放出され、炎症関連物質のオプソニン化に働くと考えられている。これまで不安定狭心症や脳血管障害などで血中に増加することが知られていて、これらの疾患の血液マーカーとして期待されている。PTX3は炎症初期に様々なタンパク質と相互作用するパターン認識受容体として働き、免疫担当細胞への抗原提示(オプソニン化)に関わっていると考えられている。このことから、PTX3が血中でどのようなタンパク質と複合体を形成しているかを調べることは、PTX3の病態との関連を知る上で重要である。本研究では、PTX3に対する特異的モノクローナル抗体を磁気ビーズに固定化して微量のPTX3を血液から回収し、形成している複合体を質量分析器(MS)にて解析する手法の開発を行った。順天堂大学病院より敗血症の患者血液の提供を受け、EDTA採血の患者血液からPTX3を磁気ビーズにより免疫精製して、MSにて同定することに成功した。メジャーな相互作用タンパク質としては、補体系タンパク質およびインターαトリプシンインヒビターを同定した。これらは、MantovaniらによってPTX3が相互作用することが報告されているタンパク質であり、この方法によってPTX3の血中での複合体を同定することができることが示されたと考えられる。さらにこれまで報告されていないタンパク質も数種類同定することに成功した。疾患とどのような関連性を持つかについては、症例数を増やして精査する必要があるが、本研究の目的とした血清マーカー複合体のターゲッドプロテオミクスによる解析手法が確立されたと考えられ、今後血液診断において重要な技術になるものと期待される。

PTX3是一种属于五肽家族的蛋白质，被认为在炎症期间从白细胞和内皮细胞中释放出来，被认为作用于炎症相关物质的调子化。到目前为止，由于心绞痛和脑血管疾病不稳定，众所周知，它会增加血液，并有望成为这些疾病的血液标记。 PTX3被认为与免疫细胞的抗原表现（调子化）有关，它是一种模式识别受体，在炎症的早期阶段与各种蛋白质相互作用。因此，重要的是要研究PTX3与血液的复合物，以了解与PTX3病理的关系。在这项研究中，我们开发了一种方法，其中将针对PTX3的特定单克隆抗体固定在磁珠上，以从血液中检索痕量的PTX3，并使用质量分析仪（MS）分析了形成的复合物。在接受Juntendo University医院的败血症患者的血液捐赠后，PTX3使用EDTA血液后的患者血液中的磁珠进行了免疫菌株，并使用MS成功鉴定出来。主要的相互作用蛋白质包括补体系统蛋白和α胰蛋白酶抑制剂。这些是Mantovani等人报道的蛋白质，被认为可以通过这种方法鉴定PTX3血液中的复合物。此外，我们已经成功地鉴定出了到目前为止尚未报道的几种蛋白质。有必要通过增加病例的数量来密切检查与疾病的关系，但是人们认为，已经建立了对血清标记物复合物的靶向蛋白质组学分析，这是这项研究的目的，并且可以预期它将成为未来血液诊断的重要技术。

项目成果

バキュロウイルスディスプレイ法を用いた高親和性抗体の作製とターゲテドプロテオミクスの応用

杆状病毒展示法制备高亲和力抗体及靶向蛋白质组学应用

• 发表时间: 2007
• 作者: Saitoh R;Ohtomo T. Yamada Y;hamada N. Nezu J. Kimura N;Funahashi S;Furugaki K;Yoshino T;Kawase Y;Kato A;Ueda O;Jishage K;Suzuki M;Fukuda R;Arai M;Iwanari H;Takahashi K;Sakihama T;Ohizumi I;Kodama T;Tsuchiya M;Hamakubo T.;浜窪隆雄
• 通讯作者: 浜窪隆雄