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神経組織に特異的な膜蛋白の構造と機能の研究

神经组织特异性膜蛋白的结构与功能研究

基本信息

批准号：
01490019
负责人：
植村慶一
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01490019/
关键词：
神経組織モノクロ-ナル抗体膜蛋白レクチン

项目摘要

神経組織には神経系の発生、分化、再生に関与する膜蛋白群が見出されている。本研究は神経組織に特異的な膜蛋白群を検出し、それらの分子の構造と機能の研究を行なうことを目的とした。実験方法として、モノクロ-ナル抗体法を用い、免疫組織学的なスクリ-ニング法によって特異的な蛋白の検出を行ない、蛋白の分析を試みた。1.新生動物脳組織の膜画分より、0.25%デオキシコ-ル酸溶液によって、膜蛋白を可溶化し、レンチルレクチンアフィニティ-カラムに吸着する画分を抗原として、モノクロ-ナル抗体の作成を行ない、神経組織に染色性の高い数種のモノクロ-ナル抗体(3G9、2B7、1C11、5H2)を得た。3G9抗体は大脳の灰白質の主に神経細胞の細胞体が染色され、グリア細胞は染色されなかった。一方、2B7抗体は白質で高い染色性が認められた。1C11抗体は大脳の細胞間質に染色性が高く、分泌性の糖質複合体である可能性が示された。5H2抗体は神経細胞および一部のグリア細胞と陽性反応を示した。これらの抗体はラットのみではなく、マウスの神経組織とも類似の反応性を示し、哺乳動物に共通に存在する可能性を示した。ウエスタンブロッチングによる免疫染色では、3G9抗体は成熟ラット脳組織の膜画分の35Kおよび100Kの蛋白と陽性反応を示したが、新生ラットではより低分子の蛋白と反応する傾向が見られた。これらの抗体が反応を示す抗原物質の細胞特異性、細胞内の局在、発生過程における変化などについて検討中である。2.脳組織の細胞核の蛋白画分を抗原として、5E5、2F7、7F10の3種のモノクロ-ナル抗体を作成した。5E5抗体はある種の神経細胞の核内構造物と特異的に反応し、2F7抗体は細胞の核膜を特異的に染色し、反応の強さは神経細胞>グリア細胞>筋細胞の順で、その他の細胞との反応は極めて弱かった。さらにウエスタンブロッチングでは2F7抗体は分子量68Kの蛋白と強い陽性反応を示した。7F10抗体はすべての細胞の核を染色し、ウエスタンブロッチングの結果から、ヒストンの1種に対する抗体であると結論された。さらに免疫電顕などによる検案を行なっている。

A group of membrane proteins related to the development, differentiation and regeneration of the nervous system has been found in the nervous system. The purpose of this study is to investigate the molecular structure and function of tissue-specific membrane proteins. Methods: Immunohistochemistry, detection of specific proteins, protein analysis 1. The membrane protein of newborn animal tissue was solubilized in 0.25% hydrochloric acid solution, the membrane protein was solubilized, the membrane protein was adsorbed on the membrane, the antigen was prepared, and the antibody was prepared. The antibody (3G9, 2B7, 1C11, 5H2) was obtained. 3G9 antibody stained the cell bodies of the main neurons in large gray lines, and stained the cells in small gray lines. One side, 2B7 antibody straight line, high staining, recognition. 1C11 antibody is highly stained in the cytoplasm of large cells and highly secreted in the glycogen complex. 5H2 antibodies are detected in some neurons. This antibody is not specific to human brain tissue, but to mammalian cells. 3G9 antibody has a tendency to react positively to mature tissue membrane fractions at 35K and 100K, and to react negatively to low molecular weight proteins. These antibodies show cell specificity of the antigenic substance, intracellular organization, and development process. 2. Three kinds of antigen-specific antibodies were prepared for the protein components of the nucleus of the tissue: 5E5, 2F7 and 7F10. 5E5 antibody can specifically stain the nuclear structure of neurons, 2F7 antibody can specifically stain the nuclear membrane of neurons, 2F7 antibody can strongly stain the nuclear membrane of neurons, 2F7 The 2F7 antibody has a molecular weight of 68K and a strong positive reaction. 7F10 antibody was used to stain the nuclei of the cells, and the results showed that F10 antibody was used to stain the nuclei. The immune system is designed to protect the immune system.