種特異的蛋白質プライミングDNA複製開始反応の分子遺伝学的研究

物种特异性蛋白质引发 DNA 复制起始反应的分子遗传学研究

• 批准号: 05640698
• 负责人: 廣川 秀夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sophia University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05640698/
• 关键词: DNA複製; プロティンプライミング; DNA5′末端結合蛋白質; 蛋白質間認識; in vitvo DNA複製開始; 種特異性

バクテリオファージM2とphi29は形態的にもゲノム上の遺伝子配置も極めて良く似た類縁ファージである。DNA複製はprotein-primingによって開始する。両ファージのprimer protein(PP)のアミノ酸配列は62%、DNAポリメラーゼ(Pol)は86%の相同性を示すにもかかわらず、それら蛋白質の遺伝子のsus変異株を用いたin vitroDNA複製系では、夫々の遺伝子に相補性が見られない。本課題研究ではPP遺伝子およびPol遺伝子を大腸菌にクローニングし、この発現系により夫々の蛋白質を精製し、in vitroDNA複製開始反応系を構築した。M2あるいはphi29由来のPP,Polと鋳型TP-DNAから成る8通りの反応系を検討した。その結果、PP,Pol,TP-DNAともhomologousの組合せの系のみDNA複製開始反応が検出された。一方、蛋白質ブロッティング法による蛋白質間の認識・結合能を測定したところM2-PPはM2-TPおよびphi29-TPに認識・結合することが分かった。同様にphi29-PPはM2およびphi29のTPを認識・結合する。しかしM2-PPはM2-Polとは結合して複合体を形成するがphi29-Polとでは結合しない。以上の結果は、ファージM2とphi29のDNA複製装置は機能構造的によくにているにも拘らず、構成蛋白質の互換がきかず、種特異性はPPとPolとの認識・結合によることが明らかとなった。

The first is the first time that a child has been placed on a computer. The second is the third time that a child has been placed on a computer. DNA replication begins with protein-priming. The amino acid sequence of the primer protein(PP) of Kaffa is 62%, and the DNA polymerase (Pol) is 86% identical. When the sus variant of the protein gene is used in the vitroDNA replication line, the complementarity of the gene is clearly seen. In this project, we studied the purification of protein and the construction of an in vitro DNA replication initiation reaction system in Escherichia coli. M2, Phi29, PP,Pol 29, TP-DNA, Pol 29, Pol 29, Pol 29, As a result, PP,Pol,TP-DNA and homologous combinations of DNA replication start to reverse engineer. The protein binding energy was determined by the protein binding method. The protein binding energy was determined by M2-PP and phi29-TP. Phi29-PP and Phi29-TP are the same. The M2-PP complex is formed by combining M2-Pol. The above results show that the DNA replication device of M2 and phi29 has a functional structure, a structural protein exchange, a species-specific PP and a recognition binding.

项目成果

KISHI,T.,MIURA,K.,MATSUNOTO,K.,and HIROKAWAM,H.: "Complementation assay of primer protein:Gene expression systems of plasmid vectors support the infection of suppressor sensitive mutamt phages M2 and phi29" Jpn.J.Genetics. 68. 243-255 (1993)

KISHI,T.、MIURA,K.、MATSUNOTO,K. 和 HIROKAWAM,H.：“引物蛋白的互补测定：质粒载体的基因表达系统支持抑制敏感突变噬菌体 M2 和 phi29 的感染”Jpn.J.

KITABAYASHI,I.,MATSUMOTO,K.,and HIROKAWA,H.: "The primer protein of bacteriopbage M2 inhibits elongation activities of its DNA polymerase" J.Gen.Appl.Microbiol.39. 467-478 (1993)

KITABAYASHI,I.、MATSUMOTO,K. 和 HIROKAWA,H.：“细菌 M2 的引物蛋白抑制其 DNA 聚合酶的延伸活性”J.Gen.Appl.Microbiol.39。

SATOH,M.,NEMOTO,Y.,KAWANO.S.,NAGATA,T.,HIROKAWA,H.and KUBOIWA,T.: "Organization of heterogeneous mitochondrial DNA wolecules in mitochondrial nuclei of cultured tabacco cells" Protoplasma. 175. 112-120 (1993)

SATOH,M.,NEMOTO,Y.,KAWANO.S.,NAGATA,T.,HIROKAWA,H. 和 KUBOIWA,T.：“培养烟草细胞线粒体核中异质线粒体 DNA 小分子的组织”原生质体。