置換型DNA複製中間体分子構造の電子顕微鏡による解析

使用电子显微镜分析取代的 DNA 复制中间体的分子结构

基本信息

  • 批准号:
    06640802
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

直鎖状2本鎖DNAの両5'末端に蛋白質を結合しているDNA・蛋白質複合体ゲノムは枯草菌ファージФ29、M2、Nfおよびアデノウイルス等で明らかにされ、DNA複製開始はプロテイン・プライミング反応によることが知られている。DNA複製開始反応に引き続き親鎖の1本、(5'側)を置換しながら伸長合成が進行する。生化学的解析から 複製中間体は単一分子長(モノメリック)な2本鎖DNAに1本鎖(置換された)が結合した形態と解釈される構造が大多数をしめることが知られている。本研究はプロテイン・プライミングDNA複製開始反応後、伸長合成へと移行しつつある全てのDNA分子種を電子顕微鏡像として明らかにすることを目的とした。とくに、置換された1本鎖によるパンハンドル型DNA分子と両末端からの置換型複製をしつつある分子の有無について検討した。ファージM2、あるいはФ29の感染菌をプロトプラスト化し、不連続密度勾配をもつCsC1溶液に直接重層し超遠心により複製中間体を分画し電子顕微鏡試料とした。最も多く観察された中間体分子型は、M2、Ф29ともに単一分子長である6μm長をもつほぼ半分が2本鎖、半分が1本鎖で構成されていた。ついで、6μm長の2本鎖DNAに1本鎖がついた型であり、しかも1本鎖の長さと、1本鎖の接着点からいずれかの2本鎖の長さが等しい分子型が観察された。今後、観察例を増やし、より正確な複製中間体の分子型を明らかにしたい。
Straight lock 2 this lock の DNA that struck 5 'end に protein を combining し て い る DNA, protein complex ゲ ノ ム は hay bacteria フ ァ ー ジ Ф 29, M2, Nf お よ び ア デ ノ ウ イ ル ス で such as Ming ら か に さ れ, DNA replication began は プ ロ テ イ ン · プ ラ イ ミ ン グ anti 応 に よ る こ と が know ら れ て い る. DNA replication begins with the reverse 応に introduction of 続 続, を lock, を (5' side) displacement, ながら elongation, and synthesis が for する. Biochemistry analysis か ら replication intermediates は 単 a long molecules (モ ノ メ リ ッ ク) な 2 this lock に DNA this lock (replacement さ れ た) が combining し た form と solution 釈 さ れ る tectonic が most を し め る こ と が know ら れ て い る. , this study は プ ロ テ イ ン プ ラ イ ミ ン グ DNA replication, elongation after an anti 応 synthetic へ と transitional し つ つ あ る て all kinds of micro mirror と を electronic 顕 の DNA molecule し て Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. と く に, replacement さ れ た this lock に よ る パ ン ハ ン ド ル type DNA molecule と struck end か ら の substitutional copy を し つ つ あ る molecular の presence of に つ い て beg し 検 た. フ ァ ー ジ M2, あ る い は Ф 29 の infection bacterium を プ ロ ト プ ラ ス ト し, not even 続 density hook with を も つ CsC1 solution に heavy layer directly し buzzer-beaters heart に よ copied intermediates を points り し electronic 顕 micro mirror sample と し た. More than most も く 観 examine さ れ た intermediates molecular type は, M2, 29 と Ф も に 単 a molecular long で あ る 6 microns long を も つ ほ ぼ half が が 1 in about two and a half this lock, the lock で constitute さ れ て い た. つ い で, 6 microns long の 2 this lock DNA に 1 this lock が つ い た type で あ り, し か も this lock の long さ と, this lock の then point か ら い ず れ か の 2 this lock の long さ が etc し い type molecular が 観 examine さ れ た. In the future and examines 観 example を raised や し, よ り correct を な replication intermediates の molecular Ming ら か に し た い.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Takada,Y.,Hirokawa,H.,Yamazaki,K.: "Bending of DNA in solution caused by a protein from Arabidopsis that binds to a TATA element" Biosci.Biotech.Biochem.58. 916-920 (1994)
Takada,Y.,Hirokawa,H.,Yamazaki,K.:“拟南芥中与 TATA 元件结合的蛋白质引起溶液中 DNA 的弯曲”Biosci.Biotech.Biochem.58。
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    0
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Kishi,T.,Miura,K.,Matsumoto,K.,Hirokawa,H.: "Effects of altered RGD(arg-gly-asp)segnences in the primer protein on the protein primed DNA replication of bacteriophage M2 in vitvo" J.Gen.Appl.Microbiol.40. 197-208 (1994)
Kishi,T.,Miura,K.,Matsumoto,K.,Hirokawa,H.:“引物蛋白中改变的 RGD(arg-gly-asp) 片段对噬菌体 M2 体内蛋白质引发的 DNA 复制的影响”J
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  • 资助金额:
    $ 1.15万
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