直鎖状DNAプロティンプライミング複製系を構成する遺伝子産物群とその機能

构成线性DNA蛋白启动复制系统的基因产物及其功能

• 批准号: 62615521
• 负责人: 廣川 秀夫
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Sophia University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62615521/
• 关键词: DNA複製; プロティンプライミング; アフィディコソン感受性

直鎖状DNAをもつバクテリオファージM2およびφ29を用いて, プロティンプライミングDNA複製系を構成する蛋白質:DNAポリメラーゼ(pol)および末端蛋白質(TP)の構造と機能を明らかにすることを目的に以下の実験を行った.1.M2TPおよびM2pol遺伝子のクローニング:TPおよびpolの遺伝子はM2ゲノムの制限酵素EcoRI断片中に位置しいるので, まずこのDNA断片をとり, さらに両遺伝子を含む, 出来るだけ短いDNA断片を得るため, HaeII, PvuI処理を行い, TP・polの両者を含む断片とpolのみを含む断片を調製した. これらを大腸菌プラスミドpKK223-3のtacプロモーター下流に挿入し, pIKM23-1, -2, -3, -4のキメラプラスミドを造成した. tacプロモーターを誘導後, 集菌, 溶菌し, 硫安沈澱により蛋白質粗画分を調製した. この画分はin vitroM2DNA複製系においてプロティンプライミング活性を示した. 現在, 各種クロマトグラフィを用いて活性画分の精製を行っている.2.アフィディコリン(APH)高感受性株の分離:枯草菌ファージM2, φ29はAPH感受性であるが, その程度は真核細胞に比して低い. そこで高感受性変異株の分離を行い, その変異がDNA複製系を構成するどの蛋白質に生ずるかを検討した. その結果, M2のTP温度感受性株から新たに2株の高感受性株を分離出来た. この変異座は, ファージの相補実験からpol, TP以下のシストロンであることが示された. 現在ところ, 遺伝子T(DNA結合蛋白質をコードする)である可能が高いと考えられ, T遺伝子のクローニングを行っている.本年度を通じて, 目的遺伝子のクローニングが進み, 部位特異的変異の導入の材料が整備された.

Straight lock DNA is used to form proteins that form the DNA replication system: DNA fragmentation The structure and function of (pol)-terminal protein (TP) are clearly defined. The following are the main objectives: 1. M2TP-and M2pol-terminal protein:TP, pol, and M2 gene fragments are located in the middle of EcoRI fragment, and DNA fragments are contained in the middle of EcoRI fragment. TP·pol This is the result of E. coli infection at pKK223-3 and pIKM23-1, -2, -3, -4. After induction, bacteria were collected, lysed, and precipitated with sulfur. This assay is in vitro M 2 DNA replication system. Now, the purification of active components of various kinds of bacteria is carried out. 2. Isolation of highly susceptible strains of Bacillus subtilis M2, φ29 and APH susceptibility is lower than that of eukaryotes. The isolation of highly susceptible mutants and the formation of different DNA replication systems are discussed. As a result, M2 with TP temperature sensitivity was newly isolated and 2 with high sensitivity were isolated. The difference between the two sides is that the two sides are complementary. Now, the gene T(DNA binding protein) may be high in number, but the gene T may be high in number. This year, we have made progress in the development of target genes, and the preparation of site-specific and different imported materials.

项目成果

Hirokawa,Hideo: "Protein-priming DNA replication of Bacillus small phages in Bacillus subtilis:Molecular biology and industrial application" Kodansha-Elsevier, (1988)

Hirokawa,Hideo：“枯草芽孢杆菌中芽孢杆菌小噬菌体的蛋白质引发 DNA 复制：分子生物学和工业应用”讲谈社-爱思唯尔，(1988)

廣川 秀夫: 遺伝学雑誌. 62. 519 (1987)

广川秀夫：遗传学杂志 62. 519 (1987)

松本 幸次: 上智大学生命科学研究所紀要. 6. 57-78 (1987)

松本幸二：上智大学生命科学研究所通报。6. 57-78 (1987)。

小林 秀夫: 遺伝学雑誌. 62. 527 (1987)

小林秀夫：遗传学杂志 62. 527 (1987)