鋳型を用いて合成したペプチドによる脂質膜中での高次構造形成

使用模板合成的肽在脂质膜中形成高阶结构

• 批准号: 05650899
• 负责人: 木村 俊作
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05650899/
• 关键词: 高次構造; α-ヘリックス; 超二次構造; 脂質膜; 環状ペプチド; de novo設計; コンホメーション解析; ペプチド工学

2本のヘリックス鎖が会合した2α構造を構築するため、環状オクタペプチドに2本のヘリックス鎖を結合したペプチドを液相法により合成し、コンホメーション解析を行った。1.環状オクタペプチド、cyclo(Lys(CHO)-Sar-Leu-Sar-Glu(OBzl)-Sar-Leu-Sar)を合成した。Ca^<2+>と錯体を形成することが示された。2.α-ヘリックスを形成する線状12量体、Boc-(Leu-Lys(CHO)-Lys(CHO)-Leu)_3-OHを合成し、2本を平行型で鋳型分子に結合した。3.CDスペクトルを測定して、コンホメーションを検討した。このペプチドは会合しやすく、ヘリックス含率は低かった。また、脂質膜に組み込んでもヘリックス含率は高くならなかった。4.線状12量体のヘリックス含率と疎水性を上げ、分子間相互作用を減らすため、Ac-Glu(OMe)-Trp-Leu-Aib-(Lys(Z)-Aib-Leu-Aib)_2-OHとH-(Leu-Aib-Glu(OMe)-Aib)_2-Leu-Aib-Lys(Z)-Aib-OAntを合成し、環状オクタペプチドに結合した。5.CDスペクトルを測定したところ、予想通り、溶液中でヘリックス構造をとることがわかった。また、ミセル中で、2本のヘリックス鎖が会合した超二次構造を形成していることが示された。しかし、脂質膜中では分子間で会合し、ヘリックス構造が乱れた。CDの測定では、脂質とペプチドとのモル比をあまり高くできないことが原因の一つである。6.ヘリックス鎖に導入したTrpとアトラセンの蛍光を測定したところ、このペプチドは膜表面に取り込まれ、ヘリックス鎖の軸は膜表面に平行であることがわかった。これは、鋳型分子のサイズが、2本のヘリックスが充填されるには小さく、分子鎖の会合によりヘリックス構造が歪むため分子の疎水性が低くなったことが原因と考えられる。7.鋳型分子としてサイズの大きい環状ドデカペプチド、cyclo(D-Lys(Z)-Sar-L-Lys(CHO)-Sar)_3を液相法により合成した。今後、これにヘリックス鎖を結合すると、より完全な超二次構造を脂質膜中で構築できると考えられる。

2 this の ヘ リ ッ ク ス locks meet が し た を 2 alpha structure constructing す る た め, annular オ ク タ ペ プ チ ド に 2 this の ヘ リ ッ ク ス を combination lock し た ペ プ チ ド を liquid phase method に よ り synthetic し, コ ン ホ メ ー シ ョ ン parsing line を っ た. 1. The annular オ ク タ ペ プ チ ド, cyclo (Lys (CHO) - Sar - Leu - Sar - Glu (OBzl) - Sar - Leu - Sar) を synthetic し た. Ca^<2+>と error を forms する とが とが shows された. 2. Alpha ヘ リ ッ ク ス を form す る line 12 quantity body, bok - (Leu - Lys (CHO) - Lys (CHO) - Leu) _3 - OH を synthetic し, 2 this を type parallel で where molecule に combining し た. 3. The CD ス ペ ク ト ル を determination し て, コ ン ホ メ ー シ ョ ン を beg し 検 た. The <s:1> ペプチド is concentrated on the やすく and the ヘリッ ス has a <s:1> low やすく content. The また and lipid membrane に groups have a み込んで み込んで ヘリッ ヘリッ ス ス ス with a <s:1> high content くならな くならな った った. 4. Line 12 quantity body の ヘ リ ッ ク ス holdup と 疎 water-based を げ, intermolecular interaction を minus ら す た め, Ac - Glu (OMe) - Trp - Leu - Aib - (Lys (Z) - - Leu - Aib Aib) _2 - OH と H - (Leu - - Glu Aib (OMe) - Aib) _2 Leu - A ib-Lys(Z)-Aib-OAntを synthesizes を, and cyclic <s:1> タペプチドに タペプチドに タペプチドに binds to た. 5. CD ス ペ ク ト ル を determination し た と こ ろ, to think through り, solution で ヘ リ ッ ク ス tectonic を と る こ と が わ か っ た. ま た, ミ セ ル で, 2 in this の ヘ リ ッ ク ス locks meet が し た super formation し secondary tectonic を て い る こ と が shown さ れ た. The で で molecules in the lipid membrane are で converseed-in <e:1>, and the ヘリッ ス structure is が disorderly れた. The reasons for the determination of で で and lipid とペプチドと <s:1> モ モ とペプチドと by CD are higher than をあま くで な な な とが とが とが by をあま. 6. ヘ リ ッ ク ス lock に import し た Trp と ア ト ラ セ ン の 蛍 light を determination し た と こ ろ, こ の ペ プ チ ド は membrane surface に take り 込 ま れ, ヘ リ ッ ク は ス の lock shaft parallel to the membrane surface に で あ る こ と が わ か っ た. こ れ は, where molecular の サ イ ズ が, 2 this の ヘ リ ッ ク ス が filling さ れ る に は small さ く meet, molecular lock の に よ り ヘ リ ッ ク ス tectonic が slanting む た め molecular の 疎 water-based low が く な っ た こ と が reason と exam え ら れ る. 7. Where molecule と し て サ イ ズ の big き い annular ド デ カ ペ プ チ ド, cyclo (D - Lys (Z) - Sar - L - Lys (CHO) - Sar) _3 を liquid phase method に よ り synthetic し た. In the future, こ れ に ヘ リ ッ ク ス を combination lock す る と, よ り な completely secondary tectonic を lipid membrane で in constructing で き る と exam え ら れ る.