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プロテインキナーゼCによる神経伝達物質トランスポーター機能の制御機構に関する研究

蛋白激酶C调控神经递质转运功能的机制研究

基本信息

批准号：
05670091
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

GABAトランスポーターに対する燐酸化酵素の影響を調べるために、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いた。つまり、ラット脳cDNAライブラリーより、GABAトランスポーター(GAT1)cDNAを用いてGAT1mRNAを合成、卵母細胞に注入することによってGAT1を発現させた。発現したGAT1は、Na^+、Cl^-依存性にGABAを取り込み、その取り込みはニペコチン酸によって、ほぼ完全に抑制された。これらのGAT1発現卵母細胞にプロテインキナーゼC活性化剤であるホルボールエステルを作用させたところ、GABA取り込みは有意に抑制され、その抑制はプロテインキナーゼ阻害薬であるスタウロスポリンによって阻害された。また、Eadie-Hofstee plotで解析したところ、この抑制は細胞外GABAに対する親和性(Km)を低下させることによることが示された。この燐酸化によるGABAトランスポーターの抑制が生理的にも起こりうるかを検討するために、ラット脳シナプトゾームを調整し、プロテインキナーゼCの影響を調べたところ、やはりGABAに対する親和性の低下によるGABA取り込みの抑制が認められた。さらに、GAT1特異抗体による免疫電顕の結果、GAT1は神経終末に存在していることが明らかになった。これらの結果から、神経終末において、GAT1はプロテインキナーゼCによって燐酸化され、GABAに対する親和性が低下し、取り込み抑制が起こることが示唆された。つまり、燐酸化によってGABAシナプス伝達の増強が起こることが推測された。

GABA was used to treat oocytes and oocytes. The acidifying enzymes were used. The cDNA was synthesized with cDNA, the oocyte was injected into the oocyte, and the GAT1 was detected by injection of the oocyte. Present GAT1, Na ^ +, Cl^-dependent GABA data, extract data, extract acid, completely suppress it. The GAT1 showed that the oocytes were activated, the oocytes were activated, the oocytes were activated, The Eadie-Hofstee plot analysis shows that the extracellular GABA is sensitive, the Km is low, and the sex is low. Acidification, GABA, inhibition, physiology, GABA, and so on. The results of immuno-electrophoretic assay of anti-GAT1 specific antibody, the results of immuno-electrophoretic assay and the presence of GAT1 specific antibody were detected by Elisa. The results are as follows: the results of the test, the results of the test, the symptoms of the GAT1, the symptoms of acidification, the symptoms of the symptoms of acidification, the symptoms of the symptoms of GABA, and the symptoms of sexual abnormalities, and the inhibition of the symptoms. The process of acidizing and acidizing has reached the level of strength and strength in the GABA process.