Na^+/Cl^-依存性トランスポーターの分子間相互作用と機能協関する蛋白質の検索

寻找与 Na^+/Cl^- 依赖性转运蛋白的分子间相互作用和功能合作相关的蛋白质

• 批准号: 09257229
• 负责人: 斎藤 尚亮
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257229/
• 关键词: ナトリウム; クロライド; セロトニン; トランスポーター; リン酸化; 脱リン酸化; 変異体

本研究では、Na^+/Cl^-依存性トランスポーターの一種であり、感情障害の原因とも考えられているセロトニントランスポーター(SET)に注目し、SETと結合し機能協関する蛋白質の検索と機能解析を目的とした。SETの生理機能を解析するために、まず、リン酸化、脱リン酸化によってSETの機能がどのように修飾されるかを検討した。SET活性は、PKCの活性化により有意に抑制され、その抑制はリン酸化酵素阻害薬によって完全に阻害された。また、不活性型のホルボールエステルはこのような抑制効果を示さなかった。また、フォスファターゼ1および2Aの阻害剤であるカリクリンAも同様にSET活性を抑制し、そのカリクリンによる抑制もリン酸化酵素阻害薬によって阻害された。これらの事実により、SET活性はリン酸化、脱リン酸化のバランスによって制御されていることが示された。Eadie-Hofstee解析により、このTPAやCLAによる制御はSETのセロトニンに対する親和性には影響を与えず、最大取り込み速度の抑制によることが示された。このプロテインキナーゼCによるリン酸化が、直接のリン酸化によるものであるかどうかを検討するために、site-directed mutagenesisを用いて、5カ所のリン酸化されうると推定されるそれぞれのセリンあるいはトレオニン残基を変異させた変異体を作製し、リン酸化、脱リン酸化の影響を検討した。その結果、すべてのリン酸化されうる部位を変異させても、TPA、CLAの効果が認められ、少なくともこの5カ所は直接リン酸化されないことが明らかになった。これらの結果から、SETはリン酸化・脱リン酸化酵素によって、間接的に制御されておいることが示唆された。今後、その間接的な制御機構を分子レベレで解明するためにSET結合蛋白の単離を行う予定である。

In this study, Na^+/Cl^-dependent proteins were identified as the cause of emotional impairment and the purpose of functional analysis of proteins associated with SET binding was discussed. The physiological function of SET is analyzed, and the function of SET is modified. SET activity, PKC activity, and inhibition of enzyme activity are intentionally and completely inhibited. The inactive type of virus has been shown to inhibit the growth of the virus. The enzyme inhibitor 1 and 2A inhibits the activity of SET, and inhibits the activity of SET. The activity of SET is controlled by the enzyme. Eadie-Hofstee analysis of TPA, TPA 5. The effect of different amino acids on the production of protein, protein and protein is discussed. The results of this study are as follows: 1. The effects of TPA and CLA are different. 2. The effects of TPA and CLA are different. The results of this study include: SET, ACID-DEACIDIZING ENZYME, INDIRECT CONTROL ENZYME In the future, the indirect control mechanism of SET binding protein will be determined.

项目成果

Nakashita M., 他: "Effects of tricyclic and tetracyclic antidepressants on the three subtypes of GABA transporter." Neurosci.Res.29. 87-91 (1997)

Nakashita M. 等人：“三环类和四环类抗抑郁药对 GABA 转运蛋白三种亚型的影响”，Neurosci.Res.29 (1997)。

Nishimura M.他: "Differential expression patterns of GABA transporters(GAT1-3)in the rat olfactory bulb." Mol.Brain Res.45. 268-274 (1997)

Nishimura M. 等人：“大鼠嗅球中 GABA 转运蛋白 (GAT1-3) 的差异表达模式。”Mol.Brain Res.45 (1997)。

Sakai N.他: "Direct visualization of translocation of γ-subspecies of protein kinase C in living cells using fusion proteins with green fluorescent protein." J.Cell Biol.139. 1465-1476 (1997)

Sakai N. 等人：“使用带有绿色荧光蛋白的融合蛋白直接可视化活细胞中蛋白激酶 C 的 γ 亚种易位。”J.Cell Biol.1365-1476 (1997)。

Obata H.他: "GABAergic neurotransmission in rat taste buds ; Immunocytochemical study for GABA and GABA transporter subtypes." Mol.Brain Res.49. 29-36 (1997)

Obata H. 等人：“大鼠味蕾中的 GABA 神经传递；GABA 和 GABA 转运蛋白亚型的免疫细胞化学研究。”Mol.Brain Res.49（1997）。

Morikawa,O., 他: "Effects of interferon-α and -γ on the transcriptional regulation of serotonin transporter." Eur.J.Pharmacol.(印刷中).

Morikawa, O. 等人：“干扰素-α 和-γ 对血清素转运蛋白转录调节的影响。”（出版中）。