DNAマイクロアレイを利用したてんかん治療薬の新規標的分子の検索

使用 DNA 微阵列寻找癫痫药物的新靶分子

基本信息

批准号：
12877016
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAマイクロアレイを用いたてんかん関連分子の検索と候補遺伝子の絞り込み野生型マウス脳とグルタミン酸トランスポーター(GLT-1)ノックアウト(KO)マウス脳からそれぞれmRNAを抽出し、それらを鋳型にしてランダムプライマーを用いてcDNAプローブを作製し、DNAマイクロアレイに適用した。野生型マウスとGLT-1 KOマウスの遺伝子発現のプロフィールの差異をコンピューター解析し、GLT-1 KOマウスにおいて特異的に発現が増加あるいは減少している遺伝子を検索し、数多くの候補遺伝子が見いだされた。その多くは、従来遺伝子機能の不明なESTタグがほとんであったが、昨今、マウスの全長cDNA配列の決定が進み、それらESTタグの配列と報告されているマウスの全長cDNA配列を比較検討することにより、その機能がある程度予測可能でかつ、脳に発現していることが確認できる候補遺伝子が見いだされた。それら候補遺伝子には、様々なシグナル伝達に寄与すると考えられるセリン・スレオニンリン酸化酵素、ユピキチン連結酵素に相同な構造を持つもの、カチオンチャネル、カルシウム輸送酵素、低分子量GTP結合蛋白質等の機能を持つ興味あるものが含まれている。現在、これらの候補遺伝子に特に注目し、1)ヘテロ型GLT-1 KOマウスにおいても、発現に差異がでるものを選出する、2)電気ショックなどで人為的に痙攣発作を誘発したマウスと正常マウスを用いてDNAマイクロアレイを行い、発現に差異が出た遺伝子と1)で発現に差異が出た遺伝子を比較し、一致するものは、てんかん発作自身によって発現が変化した遺伝子と判断し、本研究の目的遺伝子から除外する、などの検討を行い、てんかんの発症や予防に関連し、さらに、新しい抗てんかん薬の標的になりうる分子の絞り込みを行っている。

从野生型小鼠大脑和谷氨酸转运蛋白（GLT-1）敲除（KO）小鼠大脑中搜索癫痫相关的分子并使用DNA微阵列mRNA缩小候选基因，并使用这些模板作为模板，使用随机引物来制备cDNA探针，并应用于DNA Microarrays。将野生型小鼠和GLT-1 KO小鼠之间的基因表达谱差异计算机分析以搜索GLT-1 KO小鼠的特定表达增加或降低的基因，并发现许多候选基因。传统上，其中许多具有许多具有未知基因函数的EST标签，但是最近，对小鼠的全长cDNA序列的确定已经发展，并且通过将这些EST标签的序列与报告的全长cDNA序列进行比较，候选基因已经可以在某种程度上得到预测，并且可以证实它们在大脑中得到证实。这些候选基因包括具有与丝氨酸 - 苏氨酸磷酸酶同源的结构，链氨喹素连接酶以及具有功能的功能的基因，例如阳离子通道，钙转运酶和低分子量GTP结合蛋白。 Currently, we are focusing on these candidate genes, including: 1) selecting heterotype GLT-1 KO mice that differ in expression, 2) DNA microarrays are performed using mice that artificially induce seizures by electroshock and normal mice, comparing genes that differ in expression with genes that differ in expression with 1) and determining that those that differ in expression are genes whose expression has changed due to the epileptic seizure itself and exclude them from the这项研究中的靶基因。我们还正在进行研究，例如：1）选择与癫痫发作和预防相关的分子，并缩小新的抗癫痫药的靶标。