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プロテインキナーゼCサブタイプの活性化とターゲッティング機構の関連に関する研究

蛋白激酶C亚型激活与靶向机制关系研究

基本信息

批准号：
10169243
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインキナーゼC(PKC)のtranslocation(ターゲッティング)機構を解析することにより、PKC各分子種の生理的な役割について解析した。我々はGFP(Green fluorescent protein)とラット各PKC分子種(γ-,.ε-,δ-PKC)の融合蛋白質を各種培養細胞に発現させ、細胞外刺激により活性化された生細胞内のPKCの細胞内の動態の観察を行った。その結果、1)γ-,δ-,ε-PKCすべでが、G蛋白質共役型ATP受容体刺激により、20sec以内に細胞膜にtranslocationし、3min以内に元の状態に戻る(Retranslocation)。しかし、ホルボールエステル刺激によっては、すべての分子種が比較的ゆっりくりと(3-5min)ranslocationし、そのまま膜にとどまる。つまり、同一の分子種であっても、刺激により異なるターゲッティング機構を持つことが示された。2)アラキドン酸刺激により、γ-PKCは素早く細胞膜に、ε-PKCはややゆっくりとGolgi体周辺にtranslocationするのに対して、δ-PKCはtranslocationしない。つまり、同一の刺激によっても分子種によってtargeting部位(translocation)は異なることが示された。3)δ-PKCを活性化する3種の刺激(ATP,TPA,H202)は、それぞれ異なるターゲッティング機構によるものであり、細胞の機能に対する調節機構も異なると推測される。以上の結果から、PKCのターゲッティング機構は、分子種特異的、刺激特異的でありしかも時間的、空間的にも異なっていることが示され、ターゲッティング機構の解析はPKC分子種独自の機能の解明に有力な方法と考えられた。

In this study, the C (PKC) translocation was used to analyze the physiology of various molecular species of PKC. We used GFP (Green fluorescent protein) to detect the fusion protein of various PKC molecular species (γ -,. ε -, δ-PKC) in all kinds of cultured cells, and extracellular stimulation to activate the cells of PKC cells. The results were as follows: 1) γ -, δ -, ε-PKC receptor receptor, G-protein co-service ATP receptor stimulation, cell membrane translocation within 20sec, cell morphology within 3min (Retranslocation). This is the first time that the molecules have been compared to each other in terms of (3-5min) ranslocation, and that the membrane has been damaged. The organization of the same molecular type, and the same molecular species, and the same molecular type, and stimulate them to hold the demonstration. 2) Acid-stimulated, γ-PKC, ε-PKC, translocation, and δ-PKC around the body. The targeting part (translocation) of the same kind of molecular species is displayed in the same way. 3) the activation of δ-PKC. The stimulation (ATP,TPA,H202), the activation, the stimulation, the stimulation, the activation, the stimulation, the activation, the stimulation, the stimulation, the activation, the activation, the stimulation, the stimulation The results of the above results show that the PKC system, molecular specific, stimulus-specific, time-sensitive, space-time, and space-based mechanical analysis of PKC molecules are used to demonstrate the effectiveness of independent mechanical analysis.