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GFP標識プロテインキナーゼC遺伝子改変マウスの作製とその神経可塑性研究への応用

GFP标记蛋白激酶C基因修饰小鼠的产生及其在神经可塑性研究中的应用

基本信息

批准号：
10155218
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、培養細胞系を用いて、各PKCサブタイプ特異的なターゲッティング機構を生細胞内で明らかにするとともに、長期増強や長期抑圧現象におけるPKCの細胞内動態を解析することにより、PKCのシナプス可塑性における働きを明らかにすることを目的とした。そのために、1)培養細胞系におけるGFP標識PKC各分子種のトランスロケーション現象と活性化機構の関連についての解析、2)GFP標識PKCトランスジェニックマウスの作製の試みを行った。その結果、1)γ-,δ-,ε-PKCすべてが、G蛋白質共役型ATP受容体刺激により、20sec以内に細胞膜にtranslocationし、3min以内に元の状態に戻る(Retranslocation)。しかし、ホルボールエステル刺激によっては、すべての分子種が比較的ゆっくりと(3-5min)ranslocationし、そのまま膜にとどまる。つまり、同一の分子種であっても、刺激により異なるターゲッティング機構を持つことが示された。2)アラキドン酸刺激により、γ-PKCは素早く細胞膜に、ε-PKCはややゆっくりとGolgi体周辺にtranslocationするのに対して、δ-PKCはtranslocationしない。つまり、同一の刺激によっても分子種によってtargeting部位(translocation)は異なることが示された。3)δ-PKCを活性化する3種の刺激(ATP,TPA,H202)は、それぞれ異なるターゲッティング機構によるものであり、細胞の機能に対する調節機構も異なると推測される。以上の結果から、PKCのターゲッティング機構は、分子種特異的、刺激特異的でありしかも時間的、空間的にも異なっていることが示され、ターゲッティング機構の解析はPKC分子種独自の機能の解明に有力な方法と考えられた。

In this study, we analyzed the intracellular dynamics of PKC in cultured cell lines using specific PKC proteins and mechanisms, including the effects of long-term increase and long-term depression on PKC plasticity. 1) Analysis of the relationship between PKC molecular species and activation mechanism in cultured cell lines; 2) Experimental study on the mechanism of PKC molecular species activation by GFP. Results: 1)γ-,δ-,ε-PKC, G protein co-active ATP receptor stimulation, cell membrane translocation within 20sec, cell membrane state within 3min (Retranslocation). For example, if you want to increase your chances of success, you can increase your chances of success.つまり、同一の分子种であっても、刺激により异なるターゲッティング机构を持つことが示された。2) γ-PKC and γ-PKC are the main factors affecting cell membrane, ε-PKC and δ-PKC translocation.つまり、同一の刺激によっても分子种によってtargeting部位(translocation)は异なることが示された。3) Three stimulators (ATP,TPA,H202) that activate δ-PKC are presumed to be involved in different regulatory mechanisms of cellular functions. The above results show that PKC molecular species-specific and stimulus-specific mechanisms are different in time and space, and that PKC molecular species-specific mechanisms are different in function.