間質性腎炎惹起性抗原(gp54)のペプチド合成とcDNAクローニング

(1)抗ペプチド抗体と尿細管基底膜(TBM)との反応性ウシTBMから分離・精製した分子量54Kdの糖蛋白(gp54)のN末端に相当する17個のアミノ酸から成るペプチドを合成し、carrier蛋白と結合後,adjuvantとともモルモットstrainXIIIに皮下注射して抗ペプチド抗体を得た。摘出した腎臓には病理学的な変化はなく、腎炎惹起性は認められなかったが、得られた抗ペプチド抗体とウシTBMおよびヒトTBMとの反応をblottingで観察したところ、抗ペプチド抗体はヒト抗gp54抗体と同様の反応を示した。(2)mRNAについての検討ウサギ腎から抽出したmRNAを分画濃縮し、各mRNAからReticulocyte Lysateを用いて^<35>S-Methionineラベルの蛋白を合成し,モルモット抗gp54抗体とのimmunoprecipitionを施行した。その結果,fraction No.11-15のmRNAで合成された蛋白で54Kd,48Kdのバンドを認めた。(3)dot blot hybridizationgp54のN末端に相当するoligonucleotideプローブ(YY0325-1)を作成し、成人および胎児ヒト腎CDNAライブラリーより調製したDNAとの間でdot blot hybridizationを行った。成人および胎児ヒト腎cDNAに明らかなhybridizationシグナルを認めた。このプローブを用いてcDNAライブラリーをスリクーニングし、陽性プラークを現在検出している。今後、このcDNAをクローン化し、塩基配列を決定していく予定である。

(1)抗ペプチド抗体と尿細管基底膜(TBM)との反応性ウシTBMから分離・精製した分子量54Kdの糖蛋白(gp54)のN末端に相当する17個のアミノ酸から成るペプチドを合成し、carrier蛋白と結合後,adjuvantとともモルモットstrainXIIIに皮下注射して抗ペプチド抗体を得た。摘出した腎臓には病理学的な変化はなく、腎炎惹起性は認められなかったが、得られた抗ペプチド抗体とウシTBMおよびヒトTBMとの反応をblottingで観察したところ、抗ペプチド抗体はヒト抗gp54抗体と同様の反応を示した。(2)mRNAについての検討ウサギ腎から抽出したmRNAを分画濃縮し、各mRNAからReticulocyte Lysateを用いて^<35>S-Methionineラベルの蛋白を合成し,モルモット抗gp54抗体とのimmunoprecipitionを施行した。その結果,fraction No.11-15のmRNAで合成された蛋白で54Kd,48Kdのバンドを認めた。(3)dot blot hybridizationgp54のN末端に相当するoligonucleotideプローブ(YY0325-1)を作成し、成人および胎児ヒト腎CDNAライブラリーより調製したDNAとの間でdot blot hybridizationを行った。成人および胎児ヒト腎cDNAに明らかなhybridizationシグナルを認めた。このプローブを用いてcDNAライブラリーをスリクーニングし、陽性プラークを現在検出している。今後、このcDNAをクローン化し、塩基配列を決定していく予定である。