微生物のエンドグリコシダーゼを用いるアレルギン除去卵白の創製

使用微生物糖苷内切酶制备无过敏原的蛋清

• 批准号: 05680056
• 负责人: 門脇 節
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kacho Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680056/
• 关键词: endo-beta-GlcNAc-ase; オボムコイド; トリプシンインヒビター; 鶏卵; 糖鎖; ピリジルアミノ化

土壌より見出した、卵白オボムコイドの糖鎖に特異的に高い活性を有するエンドグリコシダーゼ(endo-beta-N-acetylglucosaminidase)を培養液中に多量に生産する細菌はBacillus属の一菌株と同定された。グルコース、ペプトン、酵母エキス培地で生育した本菌体を、鶏卵より調製した卵白オボムコイド0.2%のみを含む培地に移して20時間誘導培養した。培養液からendo-beta-N-acetylglucosaminidaseを種々のカラムクロマトグラフィーと分取型電気泳動装置によって精製した。補助金で購入した分取型電気泳動装置で精製した酵素標品についてSDS-PAGEを行い、本酵素が分子量約11万のモノマーなタンパクであることを確認した。本酵素の諸性質を検討したところ、他の微生物起源の酵素に比べて著しく熱安定性が低いことが明らかとなった。オボムコイドに本酵素を作用させ遊離した糖鎖をピリジルアミノ(PA)化法により蛍光標識したもの、およびオボムコイドをヒドラチン分解し糖鎖をPA化し酵素を作用させたものについて、順相カラムと逆相カラムを用いるHPLCをおこなって、その糖鎖構造を解析した。その結果、本菌のendo-beta-N-acetylglucosaminidaseはtrimannosyl coreにGlcNAcなどが数分子結合した6〜8本の比較的短い糖鎖に作用するものと考えられた。しかし部分酵素標品にはexoglycosidaseが混在し、オボムコイドの複雑で多様な糖鎖はそれによってendo-beta-N-acetylglucosaminidaseの作用を受ける糖鎖にまで分解されるので、部分酵素標品酵素によりオポムコイドは効率よく脱糖鎖された。酵素を精製オボムコイドに作用し、糖鎖を除去した脱糖鎖オボムコイドについて熱処理してトリプシンインヒビター活性を測定したところインヒビター活性の低下が見られた。糖鎖がオボムコイドの熱安定性に寄与していることが認められた。

A strain of Bacillus spp. was isolated from a culture medium containing endo-beta-N-acetylglucosaminase, which was produced in large quantities by bacteria with high activity of endo-beta-N-acetylglucosaminase. The yeast cells were cultured for 20 days, and the egg white cells were cultured for 20 days. Culture solution endo-beta-N-acetylglucosaminase seed purification The enzyme has a molecular weight of about 110,000 and is confirmed by SDS-PAGE. The properties of this enzyme are discussed in detail, and the thermal stability of other enzymes of microbial origin is lower than that of other enzymes The enzyme acts on the enzyme, dissociates the glycan, and analyzes the glycan structure using HPLC. As a result, endo-beta-N-acetylglucosaminidase of this strain binds to several molecules in the trimannosyl core, and the effect of this enzyme on the short sugar chain is examined. Some of the enzyme markers are mixed with exoglycosidase, and some of the enzyme markers are mixed with endo-beta-N-acetylglucosaminase. The enzyme purification process was carried out in order to remove the sugar lock and determine the activity of the enzyme. The sugar lock has a high thermal stability.

项目成果

K.Yamamoto,S.Kadowaki et.al.: "Novel Specificities of Mucor hiemalis Endo-beta-N-acetylglucosaminidase Acting Complex Asparagine-Linked Oligosaccharides" Biosci.Biotech.Biochem.58(1). 72-77 (1994)

K.Yamamoto、S.Kadowaki 等人：“冬毛霉内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶作用复合物天冬酰胺连接寡糖的新特性”Biosci.Biotech.Biochem.58(1)。