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Furinのゴルジ装置トランス局在化シグナルの解析

弗林蛋白酶高尔基体易位信号分析

基本信息

批准号：
05680537
负责人：
三角佳生
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Fukuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Furinはプロ型前駆体蛋白質のプロセシング酵素と考えられておりゴルジ装置トランス領域に局在している。furinはゴルジ装置内腔にN末端を突出し、一つの膜貫通ドメインを持ち、56アミノ酸残基のC末端を細胞質側に突出している典型的なI型膜蛋白質である。私はI型膜蛋白質のゴルジ装置局在化シグナルを解明するためfurin cDNAに種々の変異を導入し、COS-1細胞に発現、蛍光抗体法および免疫電顕による観察をおこない以下の結果を得た。 1.furinの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを欠失すると、furinは培養液中へ分泌される。 2.ヒト胎盤型アルカリフォスファターゼにfurinの膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを結合すると、形質膜蛋白質であるアルカリフォスファターゼはゴルジ装置局在を示した。 3.本酵素細胞質ドメインをI型形質膜蛋白質であるニューカッスル病ウイルスF蛋白質の細胞質ドメインに置換したキメラfurinは形質膜に局在する。 4.細胞質ドメインをC末端から11アミノ酸削除してもfurinはゴルジ装置局在を示したが、21アミノ酸削除すると形質膜局在を示した。 5.furin細胞質ドメインC末端から11番と21番の間のアミノ酸を欠失するとゴルジ装置局在は観察されなくなる。 6.C末端11番から21番の間の負の電荷を持つアミノ酸を電荷を持たないアミノ酸に置き換えるとゴルジ装置局在を示さなくなる。以上の結果をまとめると、furinのゴルジ装置局在化シグナルは細胞質ドメインに有り、C末端から11番と21番の間にある負の電荷を持つアミノ酸が局在化に重要な働きをしていることが示唆された。他のゴルジ装置局在I型膜蛋白質TGN38/41およびkex2 endoproteaseで報告されている細胞質ドメインのチロシン残基の関与は本酵素局在化には認められなかった。

Furin Precursor Protein and Its Application in the Field of Biochemistry Furin is a typical type I membrane protein with an N-terminal protrusion in the lumen of the device, a membrane penetration region, and a C-terminal protrusion of 56 amino acid residues in the cytoplasm. The following results were obtained by using the method of PCR, PCR and Western blot to detect type I membrane protein. 1. Furin membrane penetration and cytoplasmic secretion 2. Placenta type plasma membrane protein binding to plasma membrane protein 3. The enzyme is a cytoplasmic protein that is present in the plasma membrane of type I. 4. Cytoplasmic membrane C-terminal 11-acid removal, furin removal, plasmodium removal, plasmodium removal 5. Furin Cytoplasm C-terminal from 11 to 21, and the absence of acid in the middle of the cell. 6. The negative charge between the 11 and 21 ends of the C terminal is maintained. The acid charge is replaced by the acid charge. The above results show that the negative charge of the C-terminal between 11 and 21 points in the cytoplasm of the cell is important for the development of the cell. He reported that the protein TGN38/41 and kex2 endoprotease were related to the cytoplasmic protein residues in the enzyme system.