TypeI膜蛋白質のゴルジ装置局在化シグナルに関する研究

I型膜蛋白高尔基体定位信号的研究

基本信息

  • 批准号:
    06680595
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

furinはRR/KXRのアミノ酸配列に対して基質特異性を持つセリンプロテアーゼで、ゴルジ装置トランス領域に局在しているTypeI膜蛋白質である。furinのゴルジ装置局在化シグナルとしては細胞質ドメインにあるDDEDの(-)電荷を持つアミノ酸配列が働いており、TypeIゴルジ装置局在膜蛋白質として局在化シグナルが報告されているTGN38/41及び酵母のKex2 endoproteaseのチロシンを含むモチーフとは異なっていた。さらにfurinの細胞質ドメインに存在するチロシン残基をアラニンへの置換してもfurinのゴルジ装置局在は全く変化しなかった。私はこれらTypeI蛋白質のゴルジ装置トランス領域局在化シグナルの差がなにに起因するかを明らかにすることを目的としfurin、kex2 endoprotease及びoTGN38/41のcDNAに種々の変異を導入し、COS-1細胞、BHK細胞に発現、蛍光抗体法及び免疫電顕による観察をおこない以下の結果を得た。1.ヒト胎盤型alkaline phosphatase とTGN38/41の膜貫通及び細胞質ドメインのキメラcDNAを作成しそのまま、または細胞質ドメインのチロシン残基のアラニンへ置換を行い、COS-1細胞で発言すると変異を導入しないTGN38/41はゴルジ装置トランス局在を示した。一方変異TGN38/41は細胞表面に発現しゴルジ装置局在は示さなかった。2.TGN38/41と同様のキメラcDNAをKex2 endoproteaseの膜貫通及び細胞質ドメインを用いて作成、動物細胞に発現すると一部のkex2 endoproteaseキメラ蛋白質はゴルジ装置局在を示さなかった。また酵母で報告されている同蛋白質のゴルジ装置局在化シグナルのチロシン残基をアラニンへ置換しても局在の変化は観察されなかった。3.前述のTGN38/41キメラcDNAとfurinのcDNAをCOS-1細胞にco-transfectし免疫電顕により両分子のゴルジ装置内分布を観察すると、TGN38/41はfurinと比較してよりトランスゴルジネットワークよりに分布していた。以上の結果はTypeI蛋白質のゴルジ装置局在化シグナルが酵母と哺乳動物細胞で異なり,さらにゴルジ装置内でのTypeI蛋白質の微妙な分布の差によりゴルジ装置局在化シグナルが異なることを示唆する。
Furin is responsible for the matrix specificity of RR/KXR and the type I membrane protein in the matrix. The furin device mainly contains the (-) charge of DDED in the cytoplasm and is aligned with the acid, the TypeI device mainly contains membrane proteins and the yeast Kex2 endoprotein is included in the TGN38/41 report prepared by the furin device and the yeast Kex2 endoprotein. In addition, there are many kinds of protein residues in the cytoplasm of furin. The following results were obtained: 1. The gene expression of type I protein was detected in COS-1 cells and BHK cells. 1. The expression of placental alkaline phosphatase and TGN38/41 in COS-1 cells was studied by using the method of membrane penetration and cytoplasmic DNA substitution. A different TGN38/41 cell surface development in the device in response to 2. TGN38/41 and the same type of kex2 endoproteinase cDNA membrane penetration and cytoplasmic protein production, animal cell development, and part of the kex2 endoproteinase protein device in the field. Yeast is reported to be a member of the same protein group. 3. The TGN38/41 cDNA and furin cDNA were co-transfected into COS-1 cells, and the distribution of furin in COS-1 cells was investigated. The above results indicate that there are differences in the molecular structure of Type I proteins between yeast and mammalian cells, and that there are differences in the molecular structure of Type I proteins within the cell.

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
M.Sohda: "Molecular cloning and sequence analysis of human 372-kDa protein locaalized in the Golgi complex." Biochem.Biophys.Res.Commun.205(2). 1399-1408 (1994)
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  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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R.Resta:“T 细胞激活不需要糖基磷脂酰肌醇膜锚”J.Immunol.153。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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K.Okamoto:“Argingipain 的结构特征,Argingipain 是一种新型精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶,是牙龈卟啉单胞菌的主要牙周致病因子。”
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