カタラーゼ遺伝子の転写抑制因子のクローニング

过氧化氢酶基因转录抑制子的克隆

• 批准号: 05680594
• 负责人: 遠藤 英也
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680594/
• 关键词: カタラーゼ; 転写調節; 転写抑制因子

生体内で発生する活性酸素・過酸化水素を代謝し、無毒化するヘムタンパク質酵素であるカタラーゼは、肝臓や腎臓などで強く発現しているが、細胞の癌化にともない著しく抑制されている。この発現低下の分子機構を解明する目的で、ラットカタラーゼ遺伝子を単離し、転写調節領域の構造を解析したところ、これまでに次のことが明らかになった。(1)プロモーター領域にはTATA boxがなく、数個のCCAAT boxとGC boxをもち、さらに複数の転写開始点がみられた。(2)CAT assayとin vitro transcriptionよりG rich塩基配列がカタラーゼ遺伝子の転写抑制に強く関わっていることが示された。そこでこのG-richサイレンサーエレメントのコア配列をプローブにして、λgtll cDNAライブラリーをサウスウエスタン法によってスクリーニングしたところ、SW2クローンを得た。このクローンがコードするタンパク質(CSBPと名付けた)の構造とDNA結合の特異性、転写における機能を解析した。その結果、(1)45kDaのコード領域には、プロリンの繰り返し配列が見られるが、特徴的なDNA結合蛋白の構造はみられない。(2)G-rich二本鎖DNAに特異的に結合するが、C-rich一本鎖DNAにより強固に結合する。dG-またはdA-,dT-stretchにはほとんど結合できない。(3)CSBPを発現するベクターとG-rich配列をもつCATレポータープラスミドのコトランスフェクション実験から、CSBPが転写抑制因子であることが示唆された。(4)アルブミン遺伝子、アルドラーゼB,OTC遺伝子の上流領域にみられるG-rich配列を用いてCAT assayを行ったところ、強い転写抑制が見られた。以上の結果から、G-richサイレンサー配列のC-stretchにCSBPが強く結合し転写が抑制されるメカニズムが示された。

In vivo, the production of active acid, hyperacidity, and water metabolism, detoxification, and inhibition of cell carcinogenesis are the main factors affecting the production of active acid, hyperacidity, and water metabolism. The molecular structure of this discovery is explained in detail, and the structure of the regulatory domain is analyzed in detail. (1)TATA box, several CCAAT boxes, GC boxes, and several writing start points are included. (2)CAT assay in vitro transcription G rich base alignment The G-rich cDNA library has been developed by the G-rich cDNA library and SW2 cDNA library. The structure and DNA binding specificity of CSBP and CSBP are analyzed. The results are as follows: (1) The structure of 45kDa DNA binding protein was analyzed. (2)G-rich two-lock DNA specific binding, C-rich one-lock DNA strong binding. dG-dA-,dT-stretch. (3)CSBP is generated by G-rich alignment, and CSBP is generated by G-rich alignment. (4)The upper domain of OTC gene is G-rich, and the CAT assay is used to detect and suppress the strong gene. The above results show that CSBP is strongly combined with C-stretch of G-rich distribution and C-stretch of C-stretch distribution.

项目成果

A.Okada: "Expression of amyroid beta-protein precursor mRNAs in cultured skin fibroblasts taken from patients with dementia of the Alzheimer type." Dementia. 5. 55-56 (1994)

A.Okada：“淀粉样β蛋白前体mRNA在取自阿尔茨海默型痴呆患者的培养皮肤成纤维细胞中的表达。”

K.Ito: "Cloning and characterization of a single-strand DNA binding protein that specifically recognizes deoxy cytidine stretch." Nucleic Acids Res.22. 53-58 (1994)

K.Ito：“特异性识别脱氧胞苷延伸的单链 DNA 结合蛋白的克隆和表征。”

K.Takenaga: "Calcium-dependent binding of a protein derived from mRNA pEL98 or 18A2 that is homologous to S100 protein to nonmuscle tropomyosin." J.Cell Biol.124 (印刷中). (1994)

K.Takenaga：“与 S100 蛋白同源的 mRNA pEL98 或 18A2 蛋白与非肌肉原肌球蛋白的钙依赖性结合”（J.Cell Biol.124）（1994 年出版）。